Revista Eletrônica do Programa de Bolsas - Edição ZERO

Bolsista: AMANDA SOARES REBELO DE LANNA
Orientador(a): Kayo Cesar Bianco Fernandes
Resumo: A Baía de Guanabara é uma das maiores baías do litoral do Brasil, possui uma área superficial de aproximadamente 381 km², localizada no estado do Rio de Janeiro. Um dos grandes problemas da baía é a poluição de suas águas ocasionada, principalmente, pelo despejo ilegal e irregular de resíduos sólidos e líquidos nos rios que deságuam nessas águas. O ecossistema aquático é um dos mais ameaçados pela poluição e, consequentemente, sua qualidade vem sendo mais afetada do que os ecossistemas terrestres. Apesar de ser geralmente reconhecida a importância da manutenção da qualidade da água, na prática, ocorrem inúmeras descargas de efluentes potencialmente poluidores. Os metais pesados representam uma pressão seletiva de longa data, generalizada e recalcitrante com importância tanto ambiental como clínica que, por seleção indireta, contribui para a manutenção e disseminação de fatores de resistência aos antimicrobianos. O objetivo deste estudo é avaliar os mecanismos de co-seleção frente à presença de metais pesados em recursos hídricos destinados a recreação no Rio de Janeiro. Para isso, foram coletadas amostras de água de seis pontos distintos da baía de Guanabara. As concentrações de metais pesados foram determinadas utilizando Espectrometria de Emissão Ótica com Plasma Indutivamente Acoplado. Para o isolamento, as amostras foram concentradas em membrana de porosidade 0,22 ?M e inoculadas em meios seletivos. Foram utilizadas diferentes concentrações de zinco e níquel para recuperação de bactérias tolerantes a esses metais, e meios contendo ceftazidima, meropenem e aztreonam, a fim de selecionar microrganismos produtores de metalo-?-lactamase e carbapenemase. Os isolados foram submetidos a extração de DNA, identificação pelo sequenciamento do gene rrs do 16S rRNA. O perfil de susceptibilidade aos antimicrobianos dos isolados será avaliado pelo método de difusão de discos. O perfil de susceptibilidade aos antimicrobianos dos isolados considerados sensíveis a todos os antimicrobianos será novamente avaliado na presença de cobre e zinco. Para avaliar a alteração da atividade de efluxo dos isolados frente a esses metais, será utilizado o brometo de etídio como substrato indefinido para bombas de efluxo. Até o momento, foram recuperados 316 isolados bacterianos tolerantes aos metais e 253 resistentes aos antimicrobianos, sendo de aproximadamente 30 gêneros. Nossos resultados poderão fornecer uma melhor compreensão da influência do zinco, níquel e dos antimicrobianos na disseminação e persistência do resistoma da baía de Guanabara. Esses dados poderão contribuir para incentivar discussões a respeito do aprimoramento de políticas ambientais mais eficazes, em relação ao saneamento básico e o monitoramento da qualidade dessas águas.

Bolsista: Maria Luiza Pereira de Souza Moura
Orientador(a): Eduardo Caetano Brandao Ferreira da Silva
Resumo: A Filariose Linfática (FL) é uma doença humana causada no Brasil pela W. bancrofti (Wb). Dados da Organização Mundial de Saúde (OMS), estimam que 1,4 bilhões de pessoas no mundo vivem sob o risco de adquirir a FL e existem cerca de 120 milhões infectadas. Os métodos de diagnóstico para essa doença apresentam limitações, os parasitológicos possuem baixa sensibilidade e precisam de horário específico para coleta sanguínea (23h-01h). Enquanto os imunológicos são importados, exibem persistência da positividade mesmo com eliminação da infecção, e custo elevado gerando ônus aos cofres públicos. A OMS pretende eliminar a FL até 2030, com atual sucesso em cerca de 17 de 81 países. Como o Brasil ainda é considerado endêmico para esta doença, é necessário um teste eficiente na detecção de anticorpos anti-filariais em indivíduos positivos produzido em território nacional para auxiliar na triagem da população e contribuir com o sucesso do programa. Testes que captam anticorpos são mais confiáveis em fase de vigilância, visto que os portadores podem apresentar quantidades baixas do antígeno. Com base no que foi citado, o objetivo do presente trabalho é desenvolver e validar um diagnóstico de captura de anticorpos anti-filarias baseado em proteínas quiméricas de W. bancrofti. Para tal, o primeiro passo será construir genes quiméricos que reúnam regiões antigênicas identificadas como relevantes para o diagnóstico da FL. As proteínas quiméricas serão formadas por regiões estimuladoras de linfócitos B e específicas para Wb oriundas de diferentes antígenos. Serão utilizados os programas ABCpred, BepPred e SVMTrip para a predição de epítopos de linfócitos B em proteínas individuais de W. bancrofti. Após a seleção das regiões antigênicas, será realizado e Blastp (NCBI) para excluir as sequências similares a outras espécies de parasitas, assim diminuindo a possibilidade de reação cruzada no diagnóstico. Então, partindo das sequências de aminoácidos selecionadas, será feita a construção dos genes quiméricos, através dos programas ApeDNA e Genedesigner. À princípio dois genes serão construídos, com a possibilidade de obtenção de 4 tipos de proteínas diferentes para cada gene, totalizando 8 possíveis antígenos recombinantes quiméricos a serem testados. Então, os genes serão clonados nos vetores de expressão da série pRSET (Invitrogen), através dos sítios múltiplos de clonagem. Por conseguinte, as construções geradas serão utilizadas para transformar células competentes de Escherichia coli BL21 (DE3) pLysS e Rosetta™ 2 (Merck Millipore). A expressão das proteínas quiméricas será estimulada por IPTG e estas serão purificadas por cromatografia de troca iônica utilizando a resina Ni-NTA agarose (Qiagen), que se ligará a cauda de polihistidina da proteína. De posse das proteínas purificadas, será realizado o ELISA indireto com soros de indivíduos positivos e negativos pra FL. Para cada antígeno, serão avaliados os parâmetros de sensibilidade e especificidade, além de valor preditivo positivo e negativo. O cutoff será determinado como a média da densidade óptica (OD) do grupo negativo mais três vezes o desvio padrão desta média. As proteínas com melhores resultados serão enviadas para o Laboratório pertencente a Biomanguinhos (FIOCRUZ-RJ), onde serão produzidos o teste rápido e o ELISA comercial. Estes serão encaminhados de volta para a FIOCRUZ- PE, onde serão realizados os testes de eficiência. Depois disso, os mesmos serão avaliados com um número maior de soros oriundos de outras regiões endêmicas através de colaborações em andamento. Os testes também serão examinados por pessoal não treinado, assim descartando qualquer suposto resultado falso-positivo ou negativo. Ao final do projeto, espera-se produzir um teste do tipo ELISA e imunocromatográfico com valores maiores do que 90% de sensibilidade e especificidade. Com isso, produzir o primeiro teste comercial para a FL brasileiro, que apresente melhores parâmetros do que aqueles disponíveis comercialmente.

Bolsista: GABRIEL CARVALHO DO NASCIMENTO
Orientador(a): ADEMIR DE JESUS MARTINS JUNIOR
Resumo: JUSTIFICATIVA E RELEVÂNCIA O uso de inseticidas é uma ferramenta crucial para o controle do Aedes aegypti, vetor de dengue, Zika e chikungunya. Contudo, o uso exacerbado destes compostos tem exercido uma forte pressão seletiva para a emergência de populações resistentes aos inseticidas. A resistência a inseticidas (RI) é atualmente uma ameaça ao controle do Ae. aegypti em escala global.[1] A RI pode ocorrer por alterações fisiológicas no organismo do inseto (ex: enrijecimento da cutícula do exoesqueleto, aumento no potencial de detoxificação de xenobióticos e mutações na molécula-alvo do inseticida). No entanto, diversos estudos têm relatado que estas alterações afetam de forma negativas aspectos gerais do desenvolvimento e da reprodução do inseto. Isso porque a pressão de seleção com inseticidas seleciona os poucos indivíduos que naturalmente apresentavam alterações que provavelmente não lhes trariam vantagens em um ambiente livre de inseticida. Portanto, o inseto resistente tende a ser menos competitivo do que o susceptível.[2] Nosso grupo tem identificado populações naturais de Ae. aegypti resistentes a inseticidas, bem como selecionado linhagens resistentes em laboratório,[3,4] identificado marcadores moleculares para genotipagem dos mecanismos selecionados[5,6] e avaliando o efeito da RI no fitness do inseto.[7,8] Pretendemos contribuir para esclarecer um ponto controverso na literatura sobre se esses efeitos deletérios no inseto resistente estão relacionados a um desvio energético (trade-off) das funções fisiológicas “naturais” para suprir as necessidades das alterações selecionadas. Dispomos de linhagens de Ae. aegypti bem caracterizadas e ensaios padronizados para a dosagem de moléculas energéticas. Com a possibilidade de retorno às atividades presenciais, após a pausa em função das implicações da sindemia de COVID-19, este subprojeto tem como principal objetivo retomar a condução dos experimentos no laboratório, iniciados por outra estudante, e analisar os efeitos da resistência a inseticidas sobre as reservas energéticas de linhagens de Ae. aegypti, com diferentes genótipos associados à resistência a piretroides (mutações kdr, do inglês knockdown resistance). OBJETIVOS ESPECÍFICOS I. Manutenção de linhagens de Ae. aegypti II. Genotipagem de mutações kdr III. Quantificação de moléculas de reservas energéticas; METODOLOGIA Utilizaremos linhagens de Ae. aegypti mantidas no LAFICAVE, provenientes de populações que apresentam diferentes níveis de RI (Oiapoque, Macapá e Caseara, respectivamente, muito resistente, resistente e susceptível).[9,10] Com relação aos mecanismos de resistência, focaremos em kdr, que são mutações no gene do canal de sódio regulado por voltagem (NaV), que conferem resistência a piretroides. Oiapoque possui dois alelos kdr (R1 e R2), Macapá apenas um (R1) e Caseara não apresenta kdr (alelo S). Mosquitos da linhagem Rockefeller (referência de susceptibilidade e vigor) serão usados como controle interno experimental. Todas as linhagens de mosquitos serão mantidas em insetário com temperatura de 26 ± 1ºC, umidade relativa de 70 ± 10% e fotofase de 12 horas.[11] Para mensuração de moléculas relacionadas com armazenamento e geração de energia (glicogênio, lipídeos e proteínas) larvas com 24 horas após eclosão dos ovos serão transferidas para um recipiente (aproximadamente 50 larvas por recipiente) contendo 200 mL de água desclorada e 0,1 g de ração para peixe (Tetramin Marine®). Serão mantidos três recipientes (replicata técnica) por linhagem. Após três dias, as larvas (L3) serão separadas, lavadas com água desclorada, e individualmente congeladas à -70°C para posterior dissecção de cabeça e corpos, sendo os corpos usados na análise das moléculas energéticas de acordo com o protocolo estabelecido por Foray et al. (2012).[12] Serão avaliadas pelo menos 30 larvas de cada linhagem, em três momentos distintos (total de 90 larvas por linhagem). As cabeças das larvas serão utilizadas para extração de DNA com tampão de lise de TNES e lavagens em etanol. A genotipagem de kdr será conduzida conforme feito por Costa et al. (2020),[5] a partir de qPCR. Os valores de glicogênio e lipídeos serão normalizados pelo conteúdo proteico das respectivas larvas. Testaremos se as concentrações dessas moléculas acompanham os níveis de RI das linhagens e se os valores energéticos de cada larva correlacionam com seu respectivo genótipo kdr, buscando evidências de trade-off energético possivelmente causado pela mutação.

Bolsista: MARCO ANTONIO AZEVEDO LOPES
Orientador(a): FERNANDA DE BRUYCKER NOGUEIRA
Resumo: O vírus chikungunya (CHIKV) é um arbovírus causador de uma doença febril aguda caracterizada por grave e debilitante poliartralgia, podendo ter manifestações atípicas como complicações neurológicas. Nestes casos, o espectro clínico entre adultos e as crianças têm sido semelhantes. Além das formas clássicas poliartralgicas, no Laboratório de Flavivírus tem-se diagnosticado casos de CHIKV em casos apresentando manifestações neurológicas graves em adultos e crianças, tais como quadros de encefalites e síndrome de Guillain Barré. O CHIKV possui três genótipos distintos - Oeste Africano, Asiático e o Leste Centro Sul Africano (ECSA) e uma linhagem descendente do genótipo ECSA - Linhagem Oceano Índico – IOL. Estudos filogenéticos no Brasil demonstrou a presença dos genótipos Asiático e ECSA, introduzidos no país quase simultaneamente a partir das regiões norte e nordeste, respectivamente. No estado do Rio de Janeiro foi identificado o genótipo Asiático em casos importados em 2014 e 2015, porém a circulação do genótipo ECSA em casos autóctones foi descrita a partir do no ano de 2016. Atualmente, o genótipo ECSA tem sido reportado como o prevalentemente no país. O reconhecimento dos genótipos circulantes, possíveis variantes genotípicas e mutações no genoma viral, possui grande relevância no monitoramento de possíveis cepas mais virulentas, podendo auxiliar na adoção das medidas de controle. Constitui também um componente essencial para o entendimento da epidemiologia da doença, caracterizando fatores que levam à transmissão e dispersão viral. Neste estudo, temos o objetivo de realizar a caracterização molecular e genotipagem dos CHIKV de pacientes com manifestações neurológicas, comparando-os à cepas encontradas em pacientes sem manifestações neurológicas, almejando identificar possíveis mutações que poderiam estar associadas às diferentes manifestações clínicas dos pacientes, podendo atuar como marcadores moleculares de gravidade neurológica, através do sequenciamento genômico e ferramentas de bioinformática. Para tal, amostras de soro e/ou LCR de pacientes com manifestações neurológicas serão analisadas e comparadas às cepas encontradas em pacientes sem tais manifestações. Até o momento, das 22 amostras selecionadas, o RNA viral de seis amostras foram extraídos com o QIAmp Viral Mini Kit (QIAGEN, Inc., Valencia, EUA), de acordo com o protocolo descrito pelo fabricante. Após testes com kits de amplificação distintos, os fragmentos do genoma viral serão reversamente transcritos e amplificados através da transcrição reversa seguida da reação em cadeia da polimerase (RT-PCR) com o kit Qiagen Onestep RT-PCR para posterior sequenciamento genômico (plataforma Miseq, Illumina); para a caracterização molecular, a análise e edição das sequências nucleotídicas serão realizadas com o programa BioEdit e o alinhamento com o MAFFT. O programa MEGAX será utilizado para construção do banco de sequências para a caracterização molecular, tanto de nucleotídeos quanto de aminoácidos. A genotipagem será realizada pela ferramenta online Genome Detective virus e análise filogenética por ma?xima verossimilhanc?a (ML) com o IQ-TREE, sendo as árvores visualizadas com o Figtree.

Bolsista: Cecília Santana Rodrigues
Orientador(a): Gilmar José da Silva Ribeiro Junior
Resumo: A doença de Chagas é uma doença infecto-parasitária cujo agente etiológico é o Trypanosoma cruzi, que parasita insetos hematófagos conhecidos popularmente como barbeiros. A transmissão da doença ocorre, principalmente, através da via vetorial e a progressão clínica da doença pode promover distúrbios cardíacos e gastrointestinais com mortalidade e morbidade substanciais em 30-40% dos indivíduos cronicamente infectados. Dessa forma, a doença de Chagas se constitui como um grave problema de saúde pública, haja visto o número elevado de indivíduos encontrados na forma crônica da doença e os casos recentes de transmissão congênita e oral. Não obstante, a transmissão vetorial extradomiciliar ou por visitação de vetores silvestres aos domicílios tem sido o mecanismo principal de transmissão de T. cruzi às populações humanas, o que impacta no desenvolvimento de estratégias para controle de vetores. Além disso, a existência de cepas resistentes aos fármacos atualmente utilizados e o pouco conhecimento acerca dos mecanismos de escape do parasito dificultam a ação do sistema imunológico e dos fármacos. Segundo um estudo realizado entre 1980 e 2012, a estimativa da prevalência da doença de Chagas no Brasil representa atualmente a estimativa de 1,0 a 2,4 % da população. A Bahia apresenta a quarta maior taxa de mortalidade por doença de Chagas e o Território de Identidade de Irecê (BA) é classificado como área de alto risco para a doença. Contudo, o inquérito sorológico no Território de Identidade de Irecê não foi realizado, o que dificultou as ações de controle da doença. Assim, este subprojeto propõe a genotipagem molecular do T. cruzi em hospedeiros vertebrados e invertebrados do município de Irecê (BA), a fim de determinar a prevalência de infecção por T. cruzi em amostras de triatomíneos registrados no munícipio baiano nos últimos anos, no intuito de fornecer informações úteis para o tratamento e prevenção da doença.

Bolsista: BARBARA NOGUEIRA MARTINS
Orientador(a): Mariella Silva de Oliveira Costa
Resumo: Justificativa e relevância É por meio da imprensa que boa parte das informações em saúde chega até as pessoas. E, mesmo em meio à profusão de informações compartilhadas pelos cidadãos por meio das diferentes redes sociais virtuais, o jornalismo ainda ocupa lugar de destaque e credibilidade junto ao público que busca informações checadas e verificadas segundo critérios de noticiabilidade. Em 2020, devido à pandemia de covid-19, a pauta da saúde ocupou espaço prioritário na programação dos diferentes veículos de comunicação, ultrapassando as editorias de bem-estar, ciência e qualidade de vida, mas inserida diariamente em quase todas as áreas do noticiário: de economia, a política, passando por esportes, cultura e editoria internacional. Em meio às incertezas de uma doença nova, ainda sem cura, com vacina em fase de testes, especulações sobre tratamentos repletos de controvérsias e uma série de pesquisas em andamento, os jornalistas brasileiros podem ter experimentado uma alteração significativa em suas rotinas de trabalho. Neste subprojeto, se buscou a percepção dos profissionais do Distrito Federal sobre seu trabalho durante a pandemia. Objetivos O objetivo geral do projeto ao qual este subprojeto está ligado é compreender a percepção dos jornalistas sobre seu trabalho durante a pandemia de covid-19. Para realizar o processo de ensino-aprendizagem em nível de iniciação científica, consideram-se os seguintes objetivos específicos: - Descrever o processo de trabalho de jornalistas do DF na pandemia de covid-19 - Compreender os desafios e possibilidades da relação mídia e saúde durante a pandemia de covid-19 Metodologia A coleta de dados foi realizada por meio de entrevistas online com os jornalistas já catalogados na pesquisa O risco de quem comunica o risco e disponíveis para participar da investigação. O material foi transcrito e analisado a partir da análise de conteúdo na perspectiva de Pierre Bourdieu sobre o campo jornalístico, bem como à luz de hipóteses da pesquisa em comunicação tais como a teoria do newsmaking .O material é utilizado apenas para fins de pesquisa, sendo adotados procedimentos que garantam o anonimato, com a supressão de qualquer citação que possa identificar o informante. No tocante à ética em pesquisa, compreende-se que o risco para os sujeitos é mínimo. A pesquisa foi aprovada pelo Comitê de Ética da Fiocruz Brasília sob o número 36016720.1.0000.8027.