Revista Eletrônica do Programa de Bolsas - Edição ZERO

Bolsista: NATALIA ADRIELY RIBEIRO DA SILVA COSTA
Orientador(a): Elainne Christine de Souza Gomes
Resumo: INTRODUÇÃO: A Esquistossomose é uma doença tropical negligenciada causada por helmintos do gênero Schistosoma, onde a espécie de maior importância no Brasil é o S. mansoni. A população atingida geralmente vive em condições socioeconômicas desfavoráveis e em locais com condições ambientais precárias. A transmissão se dá pelo contato com coleções hídricas de água doce na presença de caramujos infectados, que são hospedeiros intermediários e vetores desta parasitose. Para fazer o diagnóstico da esquistossomose existem métodos parasitológicos, moleculares ou imunológicos. O método padrão-ouro recomendado pelo ministério da saúde é o parasitológico “Kato-Katz”, porém esse teste apresenta uma baixa sensibilidade em pessoas com baixa carga parasitária, resultando em diagnósticos falso-negativos. Uma alternativa ao Kato-Katz é a reação em cadeia da polimerase (PCR), técnica molecular que faz a amplificação do DNA alvo do parasito na amostra. Mas devido a necessidade de profissionais treinados, equipamentos e reagentes caros tem seu uso limitado em locais com poucos recursos. JUSTIFICATIVA: A Amplificação Isotérmica Mediada por Loop (LAMP) é um tipo de PCR, porém é um teste mais rápido, econômico, sensível e específico que é mais aplicável em campo visto que é uma reação realizada em condições isotérmicas, o que reduz o seu custo e simplifica sua execução. A técnica de LAMP já foi utilizada em outro trabalho para o diagnóstico da esquistossomose, no qual apresentou uma boa sensibilidade e foi chamada de SmMIT-LAMP (FERNANDEZ- SOTO et al., 2014). Apesar das vantagens, o LAMP apresenta uma dificuldade de preservação dos reagentes que possuem um alto custo. Porém, essa desvantagem pode ser superada pela liofilização dos reagentes, o que pode aumentar seu tempo de conservação e diminuir riscos de contaminação da reação no diagnóstico. OBJETIVOS: O trabalho teve como objetivos: 1) otimizar a técnica de extração de DNA em amostras de fezes com fenol-clorofórmio; 2) Otimizar a técnica SmMIT-LAMP e SmITS-LAMP com reagentes previamente liofilizados; 3) avaliar a sensibilidade das técnicas com quantidades conhecidas de DNA genômico de S. mansoni em comparação a outros sistemas de PCR. RESULTADOS PARCIAIS: A técnica de extração foi otimizada e apresentou um melhor resultado quando realizada com duas etapas de fenol-clorofórmio, no qual apresentou uma razão 260/280 entre 1,8 e 2,0 para todas as amostras TEL 11 a TEL 20. Para a otimização da técnica SmMIT-LAMP foi realizada uma curva de sensibilidade que teve como valor mínimo detectado 100 pg, que foi muito menor do que era esperado para a técnica, visto que em outros trabalhos a sensibilidade relatada foi maior. Devido a isso foi realizado um teste com a técnica SmITS-LAMP adaptada do protocolo utilizado por Fernadéz-Soto et. al (2020). O resultado da curva de sensibilidade para o SmITS-LAMP foi muito superior ao SmMIT-LAMP, com uma sensibilidade de 10 fg. A partir disso foi realizada a liofilização dos reagentes para o SmITS-LAMP utilizando dois sistemas. O Sistema 1 com betaína e com a enzima DNA polimerase Bst 2.0 WarmStart liofilizadas juntamente com os reagentes e o Sistema 2 sem a betaína e sem a enzima liofilizadas, adicionadas apenas na hora do experimento. O resultado da liofilização foi satisfatório apenas para o Sistema 1, que apresentou amplificação com uma sensibilidade de 1 ng. PERSPECTIVAS: A técnica de SmMIT-LAMP já foi utilizada em outros trabalhos e mostrou bons resultados para o diagnóstico da esquistossomose, além de uma boa sensibilidade, apesar disso a técnica apresentou instabilidades na sensibilidade e foi substituída pela técnica SmITS-LAMP que apresentou resultados mais estáveis. A partir disso, o melhor resultado do experimento da liofilização com a técnica SmITS-LAMP, que foi apresentado no Sistema 1 e será explorado com um volume maior de amostra e também em duplicata. Com isso, espera-se um melhor resultado na sensibilidade para concluir a otimização da técnica.

Bolsista: HADASSA DE ALMEIDA SOUZA
Orientador(a): ALZIRA MARIA PAIVA DE ALMEIDA
Resumo: Levantamento de ocorrência de ectoparasitas envolvidos na transmissão de Yersinia pestis no estado de Pernambuco entre 1995 a 2005. A peste é uma zoonose de roedores silvestres, transmitida por pulgas, que pode infectar outros mamíferos, inclusive humanos. A zoonose permanece endêmica em alguns países e um potencial causador de emergência de saúde pública de interesse nacional (ESPIN) ou internacional (ESPII) fazendo-se necessária a vigilância ativa das áreas focais e a manutenção de equipes treinadas para situações de emergência. Compreender a dinâmica da peste em diferentes ecossistemas e contextos sociais é fundamental para estabelecer estratégias de vigilância eficazes, capazes de reconhecer eventos que podem preceder o acometimento das populações humanas, como por exemplo aumento das populações de roedores/hospedeiros e pulgas/vetores, epizootias dos roedores e outros. Nesse sentido, o objetivo do estudo foi descrever as informações bióticas sobre as populações de ectoparasitos encontrados em hospedeiros nas áreas historicamente focais de transmissão na Chapada do Araripe no sertão Pernambucano. Foi realizado um estudo descritivo com abordagem quantitativa a partir de informações contidas no acervo do Serviço de Referência Nacional em Peste do Instituto Aggeu Magalhães - FIOCRUZ PE por meio de dados obtidos pelo Programa de Controle da Peste no estado de Pernambuco no período de 1995 a 2005. No período analisado o roedor sinantrópico comensal Rattus rattus apresentou maior prevalência do que as espécies silvestres (Necromys lasiurus, Galea spixii e Thrichomys laurentius, Calomys expulsus, Cerradomys langguthi, Oligoryzomys nigripes e Wiedomys pirhorrohinus), sendo a menor frequência de capturas do pequeno marsupial Monodelphis domestica que forneceu apenas 0,02% das capturas e não hospedava nenhuma pulga. Tanto o R. rattus quanto todas as espécies de roedores silvestres, hospedavam pulgas ectoparasitas das espécies Polygenis tripus, P. b. jordani e Ctenocephalides felis. A Xenopsylla cheopis foi encontrada parasitando principalmente o R. rattus e em menor frequência as espécies silvestres exceto W. pirhorrohinus e O. nigripes. A ocorrência da P. irritans foi praticamente excepcional, apenas um espécime foi encontrado em um roedor T. laurentius e forneceu apenas 0,01% total de pulgas coletadas no período. Foi observada flutuação na frequência de animais (roedores e pulgas) obtidos em relação aos meses dos anos, com elevação na quantidade de roedores capturados nos meses de junho a outubro. Os resultados mostraram uma redução do número de roedores e pulgas ectoparasitas, e os índices totais de pulgas (número total de pulgas/número total de roedores) ficaram <1, valor inferior ao índice considerado como fator de risco para peste (>1). Embora a maior quantidade de animais obtidos (roedores e pulgas) tenha sido originada do município de Exu seguido de Bodocó, Serrita, Granito, Cedro e Moreilândia a relação parasito/hospedeiro revelou maiores índices de pulgas (>1) nos municípios Cedro, Moreilândia e Exu e índices mais baixos (<1) nos municípios de Bodocó, Granito e Serrita. A abundância do roedor comensal (R. rattus) pode levar a uma maior exposição das populações humanas, especialmente considerando sua proximidade com os humanos favorecendo a propagação da peste e outras doenças transmitidas por esses roedores. Apesar da alta prevalência desses roedores a infecção não foi detectada na área estudada podendo-se atribuir aos baixos índices de pulgas no período.

Bolsista: Pérola Honorina Gomes
Orientador(a): ANNA CAROLINA PINHEIRO LAGE
Resumo: A estratégia de utilização de nanopartículas metálicas, especialmente nanopartículas de ouro (AuNps) como sondas moleculares para detecção pode levar à construção de plataformas simples e altamente sensíveis de diagnóstico, baseadas na avaliação de alterações na sua banda plasmônica. Essa estratégia baseia-se em modificar a superfície das partículas através da ligação de biomoléculas para detecção de biomarcadores alvo, incluindo DNA de patógenos. A ligação dos biomarcadores alvo promove alterações dielétricas no meio circundante às partículas alterando, dentre outras coisas, o índice de refração local. A banda plasmônica é sensível a qualquer mudança na superfície da partícula e no meio ao seu redor; por isso, quando os biomarcadores se ligam ocorre um shift do pico de absorção da banda plasmônica. Estas abordagens permitem a construção de biossensores simples, rentáveis, versáteis e com limites de detecção bastante interessantes descritos na literatura. A utilização de nanopartículas metálicas, como as AuNps, para otimizar técnicas de diagnósticos é uma aposta crescente. A técnica LAMP (Loop-mediated isothermal amplification) já facilita o diagnóstico molecular por eliminar a necessidade dos termocicladores na amplificação do DNA, por exemplo. Porém, os resultados obtidos geralmente são lidos através de fluorometria ou turbidimetria, e esses métodos precisam ser aprimorados no sentido de se aumentar a facilidade e confiabilidade e as nanopartículas metálicas podem ser aliadas na transposição dessas questões. Assim, propõe-se a o desenvolvimento de uma plataforma Nanopartículas-LAMP; A construção de um biossensor para ser utilizando em LAMP, aproveitando a sensibilidade plasmônica das partículas, as quais terão sua superfície moldada estrategicamente para o aumento da especificidade. Desta forma, o presente projeto propõe a construção de biossensores para diagnóstico diferencial de SARS-COV-2 e outros virus respiratórios como INfluenza, baseados na ligação de seu material genético amplificado à nanopartículas metálicas especificamente desenhadas para tal detecção. Estes biossensores permitem a leitura direta de amplificação de material genético via LAMP, com vantajosa diminuição do tempo da execução da técnica e aumento de sua sensibilidade especificidade de leitura.

Bolsista: Camila Fortunato Costa
Orientador(a): Rita de Cássia Moreira de Souza
Resumo: A doença de Chagas (DCh) representa um grave problema de saúde pública no Brasil. A importância dessa enfermidade deve-se à sua elevada prevalência, ampla distribuição geográfica e impacto social das formas clínicas da doença sobre os portadores. O agente etiológico desta enfermidade é o protozoário flagelado Trypanosoma cruzi. A forma mais importante de transmissão deste parasito aos seres humanos é através das fezes de triatomíneos infectados. Para o controle das populações domésticas de triatomíneos são recomendadas borrifações sistemáticas utilizando inseticidas de ação residual. Embora este mecanismo tenha alcançado sucesso satisfatório, principalmente com espécies introduzidas como o Triatoma infestans, vetores autóctones exigem constante vigilância contra a instalação de novos focos, pois a recolonização dos domicílios é precoce, sendo determinante nesse processo o peridomicílio. No primeiro inquérito epidemiológico nacional o município de Espinosa (MG) apresentou alto índice de prevalência da infecção humana (22,2%). Ademais, dados da Secretaria Estadual de Saúde para o período de 1996-2015, mostram que mais de 12.000 espécimes de triatomíneos foram capturados neste município, sendo Triatoma sordida o vetor mais capturado. Este triatomíneo possui habitat predominantemente peridomiciliar e vive em estreita associação com galinhas. Gambás e roedores são hospedeiros de reconhecida importância como fonte de infecção por tripanosomatídeos, e podem funcionar como elo entre os ciclos silvestre e doméstico do parasito. Vale ressaltar que o controle químico não é totalmente eficaz para eliminar esta espécie do ambiente peridomiciliar, em função da complexidade que representam os ecótopos neste ambiente, além da transitoriedade da ação residual. Estes fatores não só favorecem o processo de reinfestação, bem como o estabelecimento de populações resistentes ao inseticida utilizado pelo programa de controle. Neste contexto, a vigilância entomológica, no âmbito do monitoramento sistemático da distribuição espacial de populações de vetores, com verificação dos indicadores entomológicos, e o monitoramento da resistência das populações avaliadas são essenciais para predizer potenciais riscos de novos casos de transmissão, fornecendo informações que possam subsidiar o controle dessa espécie na região. Assim, o objetivo deste trabalho é avaliar a infestação domiciliar (intra e peridomicílio) pelo T. sordida em localidades do município de Espinosa. Para isso, a pesquisa triatomínica foi realizada nas unidades domiciliares de cinco localidades rurais: São Pedro (SP), Barro vermelho (BV), Curral Velho (CV), Coelheiro (CO) e Sítio do Limoeiro (SL). Os triatomíneos capturados (N=1862) foram identificados como T. sordida, separados por estádio de desenvolvimento e examinados ao microscópio, dos quais 56/1342 foram positivos para T. cruzi. As informações da captura foram utilizadas para a elaboração de indicadores entomológicos essenciais para o monitoramento do risco de transmissão vetorial da DCh. O maior índice de infestação foi constatado no SL (71,9%), seguido por CV (52,6%), CO (50%), BV (44,4%) e SP (42,8%). Entre os triatomíneos coletados 85 (4,6%) foram encontrados no intradomicílio (incluindo ninfas) e 1.777 (95,4%) no peridomicílio. O cálculo do índice de colonização peridomiciliar correspondeu a 91,3%. Considerando cada localidade, SL apresentou 100% de colonização, seguido por CV (95%), SP (96,5%), BV (83,3%) e CO (71,4%). Dos exemplares coletados no peridomicílio, 1.4496 (84,2%) infestavam galinheiros, 107 (6%) em chiqueiro de porcos, seis (0,3%) em curral de bovinos e equinos, quatro (0,2%) em depósito, 41 (2,3%) em amontoados de telhas e 75 (4,2%) de lenhas, 28 (1,6%) em fogão a lenha e 20 em outras estruturas. Finalmente, os resultados para as populações testadas quanto a suscetibilidade/resistência dos triatomíneos aos inseticidas apresentaram uma mortalidade média de 46,7 a 76,7%. A razão de resistência (RR)50 de cada população foi calculada comparando a DL50 da população estudada com a DL50 da linhagem de resistência (LRS), sendo classificadas seguindo os critérios de interpretação da RR estabelecidos pela OPAS (2005): populações com RR < 5 não representam resistência ao inseticida analisado; RR ? 5 e < 20 são consideradas populações com resistência incipiente. Assim, as populações de Espinosa-MG testadas comparativamente com a LRS, apresentaram RR50 entre 5,4 a 7,5, conformando populações resistentes.

Bolsista: angela rodrigues souza e silva
Orientador(a): ANTONIO G F PACHECO
Resumo: Introdução: O gerenciamento, tratamento e análise de dados na área epidemiologia clínica tem gerado uma grande demanda por aplicações de ferramentas adequadas de análises bioestatísticas, aumentando assim o teor da qualidade dos resultados. Os dados discutidos neste subprojeto são oriundos de uma coorte de pessoas vivendo com HIV/AIDS (PVHA) e que são tabagistas. A implementação de tratamentos para a cessação do tabagismo com o uso da terapia de reposição da nicotina (TRN) com adesivos transdérmicos em adição ao aconselhamento médico individual contribuem para a melhoria da qualidade de vida geral e principalmente para a melhora do endotélio vascular, levando a redução de eventos cardiovasculares futuros. Em tabagistas, dados da dilatação da artéria braquial (DILA) sugerem que o tabagismo promova alterações na morfologia da parede do vaso muito antes que a aterosclerose se manifeste e estas alterações também estão relacionadas à duração e ao número de cigarros fumados, além de outros testes psicológicos. Porém, mais estudos com PVHA ainda precisam ser conduzidos para melhor estabelecer a efetividade da estratégia nessa população. Objetivo: Aplicar os conhecimentos epidemiológicos e bioestatísticos nos dados coletados durante o estudo, desenvolver raciocínio metodológico, gerenciar e analisar os dados e apresentar os resultados dos acompanhamentos dos voluntários do subprojeto durante o período de 25 semanas de tratamento de cessação do tabagismo. Metodologia: Este é um estudo de coorte prospectivo de um único centro. O estudo acompanhou um total de 115 voluntários, que receberam tratamento com a TRN através de adesivos transdérmicos de 7 mg, 14 mg ou 24 mg a depender da carga tabágica, por um período de 12 semanas, posteriormente acompanhados por mais 12 semanas após o fim do tratamento. Nas semanas 4, 8, 12 e 24 foram realizados levantamentos socioeconômicos, perfil clínico/laboratorial e medição da função endotelial através da medida da dilatação mediada por fluxo da artéria braquial (FMD) da linha de base e semana 12 (?%FMD= %FMD na semana 12 -%FMD na linha de base) entre aqueles com abstinência contínua e aqueles com recaída através da mensuração do monóxido de carbono no ar exalado (COex). Resultados: Dentre os participantes, a idade mediana foi de 45,5 anos (IQR= 36,4-54,8); 22 (20,4%) tinham hipertensão, 9 (8,3%) diabetes e 30 (27,8%) dislipidemia, quase metade fumava mais de 20 cigarros/dia (41,7%). Os indivíduos viviam com HIV por uma mediana de 10,9 anos (5,7-17,4) e estavam em terapia antirretroviral por 8,6 anos (3,7-13,6) com mediana de Nadir de CD4 de 307 (153-490,5). A mediana do diâmetro da artéria braquial foi de 3,6 mm (IQR= 3,2-4,1). A análise não ajustada mostrou que anos de tabagismo, idade mais jovem e raça branca foram associados com %FMD menor (abaixo do percentil 75 [9,49%]). Após 12 semanas, 29,6% dos participantes pararam de fumar. A comparação da mudança de ?%FMD desde a linha de base até a semana 12 mostrou que entre os participantes aderentes à terapia, houve um aumento no ?%FMD quando comparados àqueles que recidivaram (1,11% [0,29-2,93] vs -0,15% [-1,8- 0,91], p<0,001). Após ajuste para os fatores cardiovasculares, a regressão linear múltipla mostrou que os participantes que pararam de fumar apresentam aumento médio de 2,53 (p=0,007) pontos a mais no ?%FMD em comparação aos que continuaram fumando. Conclusão: Este estudo fornece evidências de que uma estratégia de TRN e aconselhamento é eficaz para a cessação do tabagismo em PVHA e melhora a saúde vascular em um curto período de tempo. Isso reforça a importância dos amplos programas antitabagismo nas clínicas de HIV e o impacto esperado na redução da incidência de futuros eventos cardiovasculares.

Bolsista: Isabelle Mello Vieites
Orientador(a): IVANILDO PEDRO DE SOUSA JUNIOR
Resumo: As infecções virais das células do sistema nervoso central e periférico podem levar a danos neurológicos com consequências ainda não muito bem conhecidas. Recentemente, alguns estudos têm associado desenvolvimento de doenças neurodegerativas, tais como Parkinson, Alzheimer ou esclerose lateral amiotrófica a infecções virais. As infecções causadas pelos Enterovírus (EV) representam uma importante parcela na etiologia das infecções agudas (meningites, paralisias, encefalites) que acometem o sistema nervoso central. Os EV exploram seletivamente elementos específicos da célula hospedeira, onde os fatores celulares são fundamentais para regular a replicação do RNA viral e as alterações no tráfego de componentes celulares. Pouco se sabe sobre como essas mudanças são controladas no nível molecular e se elas estão relacionadas ao desenvolvimento de doenças neurodegerativas. A possível associação entre um importante vírus neuroinvasivo (EV) e o desenvolvimento de doenças neurodegenerativas ajudará a compreender a patogênese destas doenças favorecendo o desenvolvimento de novas estratégias para diagnóstico e futuras terapias.