Revista Eletrônica do Programa de Bolsas - Edição ZERO

Bolsista: Débora Fernandes Diniz
Orientador(a): GILBERTO MARCELO SPERANDIO DA SILVA
Resumo: O vírus que causa a síndrome respiratória aguda grave (SARS-CoV-2) foi identificado como causa da doença denominada COVID-19, onde o SARS-CoV-2 foi inicialmente identificado na cidade de Wuhan (China) e se espalhou causando um processo pandêmico, segundo dados recentes da organização mundial saúde temos hoje cerca de 141 milhões de casos confirmados no mundo e aproximadamente 3 milhões de mortes devido a este vírus ou suas complicações. Desde fevereiro de 2021 estamos acompanhando tratamentos realizados em uma coorte de pacientes internados por COVID-19 (Projeto aprovado CEP INI Fiocruz, CAAE: 42119321.7.0000.5262) na intenção de avaliar aspectos de segurança relacionados nestes tratamentos. Considerando que COVID-19 é uma doença nova e que pouco se conhece sobre as características dos indivíduos acometidos por esta doença, o presente projeto tem como objetivo principal avaliar o estado nutricional, características sociodemográficas desta coorte, assim como a prevalência de comorbidades como: obesidade, hipertensão, diabetes, dislipidemias em uma coorte de 385 pacientes internados no centro hospitalar da Fiocruz. Os dados serão coletados imediatamente após a confirmação do teste da PCR como positiva. Adicionalmente, o presente estudo fica caracterizado como estudo observacional e seccional. Em princípio, fica previsto que a coleta de dados desta pesquisa seja feita por acesso remoto. Os dados serão coletados dos prontuários dos pacientes internados e não está prevista a necessidade de contato com o paciente, isto é, sem riscos para o aluno de infecção pelo SARS-CoV-2, seguindo assim a orientação por parte da direção de ensino do INI. Será confeccionado um banco de dados com auxílio do portal REDCap, coletando as variáveis sociodemográficas, antropométricas como peso e altura dos pacientes internados, comorbidades como obesidade, hipertensão, diabetes, dislipidemias, etc. Será realizada uma análise exploratória dos dados para confecção dos resultados e relatório do PIBIC, em princípio será realizada no software R. Resultados: Espera-se descrever as principais características do estado nutricional desta população, assim como as características sociodemográficas e a prevalência das comorbidades desta coorte.

Bolsista: PAMALLA DE ARAUJO PEREIRA
Orientador(a): LUCIANA VELOSO DA COSTA
Resumo: Bio-Manguinhos é a unidade da Fiocruz produtora de vacinas, reativos e biofármacos. Durante a produção de vacinas, rígidas normas devem ser seguidas para a obtenção de produtos seguros e o conhecimento da microbiota associada a esses processos é estratégico para a adoção de medidas preventivas ou corretivas, assim como na avaliação dos riscos associados. Vários grupos microbianos podem estar presentes como contaminantes de áreas limpas, como os fungos, cujo método convencional de identificação é baseado nas características morfológicas da cultura e das estruturas de reprodução, o que demanda um longo tempo. A Espectrometria de Massas por Ionização/Dessorção a Laser Assistida por Matriz por Tempo de Voo (MALDI-TOF MS) é uma metodologia rápida, de simples execução e de baixo custo. No entanto, a deficiência das bases de dados quanto a espécies de origem ambiental representa uma limitação para aplicação nas indústrias farmacêuticas. Por outro lado, metodologias genotípicas demonstram eficiência e confiabilidade na identificação de fungos, embora sejam dispendiosas e laboriosas. De 2018 a 2020, foram isoladas 127 linhagens de fungos em Bio-Manguinhos: 60% foram identificadas em nível de gênero e 40% não foram identificadas, o que demonstra a necessidade de metodologias mais eficazes. O objetivo deste projeto é identificar fungos filamentosos isolados em Bio-Manguinhos através de análise proteômica e sequenciamento genético. Serão selecionadas cerca de 50 linhagens de fungos isolados de diferentes fontes durante a cadeia produtiva de Bio-Manguinhos, de 2018 a 2020. Será realizada a caracterização macroscópica e microscópica. Após a manipulação, os isolados fúngicos serão preservados em solução salina tamponada a 2-8ºC. As linhagens serão identificadas por análise proteômica em VITEK® MS; e por sequenciamento da região D2 da subunidade 28S do DNA fúngico. Finalmente, o poder discriminatório de cada técnica será calculado utilizando-se o Índice de Simpson. Espera-se, com este projeto, ampliar a capacidade de identificação de fungos em nível de gênero/espécie do Laboratório de Controle Microbiológico de Bio-Manguinhos, o que auxiliará na tomada de ações preventivas e corretivas, assim como na avaliação dos riscos associados aos processos produtivos de vacinas, reativos e biofármacos.

Bolsista: Giovanna Merrelho Monteiro
Orientador(a): MARCELO LUIZ LIMA BRANDAO
Resumo: O Instituto de Tecnologia em Imunobiológicos (Bio-Manguinhos), é responsável pelo desenvolvimento tecnológico e pela produção de vacinas, reativos e biofármacos voltados para atender prioritariamente às demandas da saúde pública nacional. Em 2019, a unidade entregou ao Programa Nacional de Imunizações (PNI) cerca de 109 milhões de doses de vacinas. Bio-Manguinhos ocupa uma posição de destaque como fornecedor de vacinas ao PNI, uma vez que das 15 vacinas que compõem o Calendário Nacional de Vacinação, sete são fornecidas pelo Instituto. Em adição, Bio-Manguinhos está fornecendo a vacina covid-19 recombinante, que é um produto de extrema importante para o combate à pandemia no país. O controle de qualidade dos produtos biológicos quase sempre implica no emprego de técnicas biológicas que têm uma variabilidade maior que outras determinações. Desta forma, o controle durante o processo adquire grande importância, porque desvios da qualidade podem não ser detectados nos ensaios realizados no produto final. De acordo com a Organização Mundial da Saúde (OMS), os agentes adventícios são aqueles que podem ter sido inadvertidamente introduzidos no processo de fabricação podendo contaminar o produto final. Dessa forma, recomenda-se a realização de uma série de análises em várias etapas na produção para demonstrar a ausência e/ou níveis aceitáveis de contaminação. Segundo a OMS, as infecções causadas por bactérias resistentes são responsáveis por um grande número de mortes em todo o mundo. Entre as espécies listadas nas quais a resistência é de maior preocupação para a saúde pública está a bactéria Stenotrophomonas maltophilia. Esta espécie já foi isolada de amostras de ar, áreas limpas e pontos de água purificadas pertencentes a indústrias farmacêuticas no Brasil. S. maltophilia é um bacilo Gram-negativo considerado um patógeno oportunista amplamente difundido, estando mais comumente associado a infecções respiratórias. S. maltophilia possui grande relevância clínica no Brasil e no mundo devido ao surgimento de cepas multirresistentes e seu difícil tratamento e erradicação em ambientes de assistência à saúde. Estudos realizados em outros países identificaram que S. maltophilia foi a espécie, dentre os bacilo Gram-negativo multirresistentes, mais frequente em infecções de pacientes doentes críticos com COVID-19. O objetivo deste projeto é caracterizar linhagens de S. maltophilia isoladas de uma indústria farmacêutica. Aproximadamente 40 linhagens isoladas no período de 2010-2020 serão submetidas a uma caracterização polifásica: 1) caracterização fenotípica com uso do VITEK® 2.0; 2) caracterização proteômica com o uso do sistema semi-automatizado VITEK® MS; 3) caracterização molecular pela técnica do Multi-Locus Sequence Typing. Posteriormente, análises filogenéticas serão conduzidas com os sete genes concatenados com a construção da árvore filogenética Neighbor-joining e a relação entre os ST e os CC identificados nas diferentes áreas ao longo do tempo com uso do algoritmo minimum-spanning tree com software Bionumerics 8.0. Serão determinados os STs mais prevalentes nas áreas e períodos avaliados e estes serão comparados com as cepas depositadas no banco de dados para uma avaliação epidemiológica da distribuição destes clones no Brasil e no mundo utilizando as ferramentas disponíveis no banco. Espera-se a criação de um banco de dados com o perfil epidemiológico das linhagens estudadas, para uso como ferramenta de avaliação de risco mais robusta em Bio-Manguinhos. Além disso, será possível avaliar a circulação de clones epidêmicos associados a casos clínicos no Brasil e no mundo dentro da indústria farmacêutica.

Bolsista: Jady Moreira da Silva
Orientador(a): Milena de Paiva Cavalcanti
Resumo: Devido ao baixo número de drogas disponíveis para o tratamento das leishmanioses, faz-se necessário constantes estudos para o desenvolvimento de novos compostos com potencial terapêutico, para aumentar o arsenal terapêutico. Moléculas de origem natural vêm sendo investigados, dentre eles, alguns microrganismos fotossintetizantes (MFs), os quais já foram observados um potencial imunomodulador e leishmanicida/leishmaniostático. As microalgas e cianobactérias apresentam uma ampla diversidade química e metabólica, e são fontes de substâncias ativas que podem ser utilizadas no tratamento de várias doenças. Poucas espécies de MFs foram exploradas, havendo pouco conhecimento sobre as atividades biológicas desse grupo, sendo necessário mais estudos que avaliem a capacidade de se tornarem potenciais terapêuticos. O presente grupo de pesquisa vem avaliando o potencial leishmanicida de extratos bioativos de MFs e até o momento foi possível observar uma boa atividade contra formas promastigotas de Leishmania infantum, além de possuírem uma baixa toxicidade às células de hospedeiros humanos e caninos, apresentando também um efeito imunomodulador, através da indução de citocinas de perfil protetor. O presente estudo tem como objetivo avaliar o potencial terapêutico do extrato bioativo de Arthrospira platensis contra a leishmaniose visceral a partir de ensaios pré-clínicos. Será realizada a infecção de modelos murinos com L. infantum e, posteriormente, será realizado o tratamento dos grupos estudo com o extrato da A. platensis e com as drogas de referência. Ensaios serão realizados para quantificação da carga parasitária dos grupos de estudo pré e pós tratamento. Por fim, a carga parasitária nos grupos de estudo tratados com o extrato bioativo será comparada com os grupos tratados com as drogas de referência. Para isso, a cianobactéria será cultivada para obtenção do extrato bioativo através do método de sonicação. Camundongos da linhagem BALB/c serão fornecidos pelo Biotério de criação do IAM/FIOCRUZ-PE. Os ensaios de infecção e tratamento possuem aprovação da Comissão de Ética no Uso de Animais (CEUA), parecer nº175/2021. O total de 50 animais será utilizado no estudo, sendo divididos em grupos de acordo com os tratamentos realizados: PBS (Tampão fosfato) como controle negativo; SbV (Antimoniato de N-Metilglucamina) e MTF (Miltefosina), como drogas de referência, além do EAP (Extrato de Arthrospira platensis) em duas concentrações. Para os ensaios de infecção animal, formas promastigotas de L. infantum serão expandidas até a fase de crescimento exponencial em meio de cultura Schneider suplementado. Serão inoculados 1x108 células, em aproximadamente 0,2ml, a depender do peso do animal, por via intraperitoneal. Após confirmação da infecção, os animais serão tratados diariamente com os diferentes protocolos terapêuticos. Após o término do tratamento, será realizada a eutanásia nos animais de acordo com os padrões estabelecidos pelo laboratório de experimentação animal. Para a avaliação da carga parasitária dos grupos, será coletado o sangue dos animais em três períodos diferentes (7 dias após a infecção, 10 dias após o início do tratamento e após o último dia de tratamento). A extração de DNA será realizada pelo kit QIAamp DNA Mini Kit (QIAGEN Sample and Assay Techonologies). O DNA obtido será quantificado através da qPCR em tempo real de acordo com Paiva-Cavalcanti et al. (2009). Todas as amostras serão analisadas em triplicata e os resultados serão expressos como a média ± desvio-padrão. Para a análise de dados será realizado teste estatísticos com auxílio do programa GraphPad Prism 5, sendo considerados significativos quando p < 0,05. O trabalho a ser desenvolvido visa gerar subsídios científicos que propiciem a realização de estudos posteriores (como os ensaios clínicos), que possibilitem a utilização destas moléculas de forma aditiva ou substituta à terapia atualmente usada.

Bolsista: HELLEN VALERIO CHAVES MOURA DE SOUZA
Orientador(a): LUCAS VILLAS BOAS HOELZ
Resumo: Neste trabalho, simulações por DM de 100ns foram realizadas, com o objetivo de estudar o comportamento dinâmico da enzima CRZ do T. cruzi em sua forma apo e complexada com cinco Inibidores da calsse 2-acetamidotiofeno-3-carboxamida. A partir dos resultados obtidos, pode-se concluir que os inibidores 1-5 ligam-se à CRZ via ligações de hidrogênio, principalmente, com os resíduos Gln19, Gly20, Ser64, Gly66, Leu67, Leu160, Asp161, Ser183 e Thr184. Dentre os resíduos apresentados, Gln19, Gly66, Leu67 e Asp161 se destacam, pois, ratificam os resultados descritos nos trabalhos de Wiggers e colaboradores e Hoelz e colaboradores (WIGGERS et al., 2013; HOELZ et al., 2015). As análises também sugerem que a compacidade da CRZ não sofre alterações significativas, mantendo a composição da estrutura secundária estável durante toda simulação, mesmo quando complexada com os inibidores 1-5. O estudo dos movimentos de alta amplitude e de baixa frequência da CRZ mostrou que a enzima, na forma apo, apresentou maior amplitude de movimentos na alça L3. No entanto, a interação dos inibidores 1-5 na CRZ promoveu uma mudança da amplitude e direção de movimento dessa mesma alça. Por meio da análise de correlação cruzada propõe-se que a interação dos inibidores 1-5 na CRZ foi capaz de diminuir os movimentos correlacionados da estrutura dessa enzima, incluindo as flutuações dos resíduos da tríade catalítica (regiões 1 e 5). Com a análise do mapa rede, pode-se sugerir que a interação dos inibidores 1-5 aumenta o número de comunidades presentes na hélice, que possui o resíduo Cys25 (resíduo catalítico), onde esse processo parece estar diretamente ligado à inibição enzimática. Além disso, pode-se propor que a energia livre de ligação dos inibidores 1-4 é um fator importante para a inibição competitiva da CRZ, onde uma energia mais negativa representa uma maior afinidade do inibidor pela enzima CRZ. Portanto, os resultados apresentados neste trabalho contribuem para um melhor entendimento do mecanismo de inibição da enzima CRZ, mediado por inibidores não-covalentes, auxiliando, dessa forma, o planejamento de novos agentes terapêuticos contra a doença de Chagas.

Bolsista: Julliana Finotelli dos Santos
Orientador(a): MONICA MACEDO BASTOS
Resumo: A Leucemia Mieloide Crônica (LMC) é caracterizada pela presença de um cromossomo anormal denominado Philadelphia (Ph). A existência deste cromossomo faz com que o organismo expresse uma proteína híbrida BCR-ABL, e esta apresenta a atividade da tirosina cinase de forma anormal, sendo responsável pela patogênese da doença. O mesilato de imatinibe foi o primeiro representante da classe dos inibidores de tirosina cinase (ITC) BCR-ABL para o tratamento da LMC. No entanto, o aparecimento recorrente de resistências tem desafiado o tratamento com o uso destes inibidores. Este fato resultou no desenvolvimento de novos inibidores conhecidos como a segunda geração dos “tinibes”, tendo como representantes o nilotinibe, dasatinibe e bosutinibe. O ponatinibe, um ITC BCR-ABL de terceira geração, é o único capaz de contornar a mutação T315I presente no domínio da BCR-ABL1; contudo, os efeitos colaterais severos limitam o seu uso. Na busca por novos ITC, Park e colaboradores realizaram estudos que demonstraram que o nocodazol e derivados contendo o grupo ureia induzem apoptose em células de leucemia linfoide crônica (LLC), e os resultados dos estudos demonstraram potência submicromolar em ensaios enzimáticos para LMC, incluindo a formas mutante resistente. Diante deste cenário, neste projeto pretende-se realizar a síntese e a avaliação de dez novos derivados contendo o grupo ureia. A metodologia proposta para a obtenção dos compostos-alvo consiste em uma síntese convergente com três ou quatro etapas reacionais. Até o momento foram obtidos os intermediários 9 e 16a. A metodologia escolhida para a obtenção do intermediário 9 foi bem-sucedida. No entanto, apesar da obtenção do intermediário 16a gerar o resultado esperado, observou-se um baixo rendimento e dificuldades para purificação. Os intermediários 11 e 12 não foram obtidos com sucesso. Novas metodologias estão em curso na obtenção dos intermediários 11, 12 e 16a, porém ainda sem resultados para compor o relatório. Cabe destacar que, o andamento das etapas do projeto está no prazo estabelecido e de acordo com o cronograma inicialmente proposto.