Revista Eletrônica do Programa de Bolsas - Edição ZERO

Bolsista: ADRESSA NUNES FURTADO
Orientador(a): ANA PAULA D ALINCOURT CARVALHO ASSEF
Coorientador(a): TECA CALCAGNO GALVAO
Resumo: As polimixinas (PMs) têm ação potente sobre várias bactérias Gram-negativas, mas seu uso foi praticamente abandonado devido aos efeitos colaterais adversos. No entanto, com a disseminação global de linhagens resistentes aos carbapenemas e à falta de novos antimicrobianos, as PMs estão novamente em uso, como antibióticos de último recurso. Como consequência, a resistência a essa classe de antimicrobianos aumentou, o que é motivo de grande preocupação. A resistência a PMs é majoritariamente causada por mutações nos sistemas de dois componentes (SDCs) PhoPQ e PmrAB ou por inativação de MgrB, repressor de PhoQ. SDCs modulam diversos processos biológicos bacterianos: um sinal ambiental (ex metais, pH) dispara autofosforilação da histidina kinase sensora e a transferência do fosfato para uma proteína reguladora de resposta (RR). Uma vez fosforilados, os RR modulam a transcrição de seus genes alvo. Mutações em phoPQ e pmrAB de Klebsiella pneumoniae (KP) são importantes pois resultam em ganho de função, mediante ativação constitutiva dos operons arnBCADTEF, pmrE e pmrCAB, que codificam as enzimas responsáveis pelas modificações no LPS associadas a resistência à polimixina. Em um amplo estudo com 149 isolados de KP PM-R da Coleção de Bactérias de Infecção Hospitalar (albergada no LAPIH), identificamos 54 mutações não sinônimas nos genes de phoPQ e pmrAB, das quais 13 ocorrem em isolados que apresentam o gene mgrB intacto. Isto é relevante pois MgrB mantém PhoQ inativo, de modo que sua inativação (por mutações ou inserção de IS), também resulta em resistência ao deixar PhoPQ permanentemente ON. Vários destes isolados foram identificados em clones de grande relevância epidemiológica, dada sua ampla distribuição no Brasil (Neto et al., submetido). No intuito de revelar as bases bioquímicas e estruturais de como as substituições em PmrAB e PhoPQ causam resistência, em um projeto mais amplo (coordenado pela coorientadora T. Galvão e financiado pela Rede Internacional do Instituto Pasteur), é essencial saber quais destas 13 substituições por si só conferem resistência a PMs. Adicionalmente, este subprojeto contribui a elucidar quais das quase duas centenas de substituições descritas em PhoPQ e PmrAB em isolados clínicos resistentes a polimixinas (PM-R) de fato conferem resistência. Portanto, o objetivo deste projeto é identificar quais das mutações identificadas na Coleção do LAPIH causam resistência, gerando conhecimento sobre as bases moleculares deste processo e contribuindo ao desenho de testes de diagnóstico baseados em ácidos nucleicos. Objetivo geral Identificar as substituições em PmrAB e PhoPQ de isolados clínicos de KP PM-R da coleção do LAPIH com papel funcional em resistência. Objetivos específicos Mapear as substituições escolhidas nas regiões funcionais e domínios estruturais de PmrAB e PhoPQ. Gerar plasmídeos codificando as mutações escolhidas, mediante mutagênese sítio dirigida. Verificar o impacto das substituições na CIM de PMs. Metodologia Análise computacional Foram gerados modelos de PmrAB pelo AlphaFold, e as substituições que ocorrem em regiões funcionais estão sendo mapeadas. Em paralelo, ClustalW foi usado para realizar um alinhamento das sequências de PmrAB e PhoPQ com as do SDC homólogo HK853/RR486. A partir do qual está sendo feita uma comparação da posição das substituições escolhidas com as de amino ácidos equivalentes em diferentes estruturas HK853/RR486 resolvidas por cristalografia de raios X, e equivalentes a diferentes estados funcionais. Mutagênese sítio dirigida Plasmídeo carreando o operon phoPQ foi adquirido de empresa de síntese (FastBio). O plasmídeo carreando o operon pmrAB será adquirido da mesma empresa. As 12 mutações selecionadas serão introduzidas por SDM Quikchange e os plasmídeos serão transformados na cepa KP MGH 78578. CIM de polimixinas As cepas recombinantes de KP serão testadas com o método padrão ouro, de microdiluição em caldo, como descrito no documento M07-A10 do CLSI (BrCast 2020).

Bolsista: RAYNE HELEN LOPES DE OLIVEIRA
Orientador(a): CECILIA VIANNA DE ANDRADE
Coorientador(a): Não informado
Resumo: O rastreio do câncer do colo uterino de forma sistemática e organizada leva a uma queda na incidência do câncer cervical. Mesmo com a Introdução da vacinação contra o HPV, que é efetiva e leva a uma alta proteção ao câncer cervical, o rastreio continua sendo uma importante ferramenta para reduzir as taxas de câncer cervical em pacientes não imunizadas ou com cânceres relacionados aos Tipos de HPV não contemplados pela vacina. Com a evolução do rastreio e a melhor compreensão do processo de oncogênese do carcinoma escamoso do colo uterino, o NIC2, que até pouco tempo atrás era considerado um ponto de corte inequívoco para tratamento cirúrgico, atualmente é considerado uma lesão com alto percentual de regressão. Em 2018 foi publicada uma metanálise onde o percentual de regressão da NIC2 foi estimado em 50%, persistência em 32% dos casos e 18% para progressão, levando ao conhecimento atual que a maioria das lesões de NIC2 regridem espontaneamente, especialmente em pacientes jovens. Ainda não há critérios claros moleculares ou morfológicos que sejam preditivos de evolução das NIC2, apesar das recomendações da LAST 2012 sugerir a utilização do p16 para decisão de tratar ou acompanhar as pacientes, em estudos prévios do nosso grupo não é um exame acurado. A infecção persistente por HPV de alto risco é um dos principais fatores de risco para o carcinoma escamosos do colo uterino. Visando avaliar se o tipo de HPV encontrado pode ser preditivo de evolução ou regressão espontânea de NIC, foi proposto um estudo de coorte com pacientes de NIC2 para identificar biomarcadores úteis para diferenciar o NIC2 com maior potencial regressor dos casos com maior potencial de progressão/persistência. Os casos de NIC2 foram incluídos de duas formas uma prospectiva ainda recrutando e seguindo as pacientes e uma retrospectiva com localização dos casos de NIC2 no arquivo da Coordenação diagnóstica de patologia. O diagnóstico de NIC 2 na biopsia foi definido pela concordância de pelo menos dois patologistas que avaliaram as amostras de forma independente, os casos de discordância formam definidos por diagnóstico de consenso entre três patologista avaliando o caso em conjunto. O desfecho clínico foi definido, nos casos tratados, pela análise do procedimento excisional. Os casos não tratados tiveram o desfecho definido pelo resultado das citologia, colposcopia de seguimento e/ou nova biópsia realizada por indicação do ginecologista, casos os achado de colposcopia e citologia não fossem concordantes foi considerado o achado mais grave, exceto nos casos em que foi realizado nova biópsia em que o resultado desta foi utilizada para definir o desfecho. Foi considerado como não regressão a persistência de NIC 2 ou mais no espécime histológico resultante de procedimento excisional ou de biópsia realizada por suspeita de progressão. A regressão completa foi definida pela ausência total de doença no espécime histológico de procedimento excisional ou em duas citologias e colposcopias negativas e com junção escamocolunar (JEC) completamente visível em intervalos semestrais. Casos que apresentaram lesão de baixo grau (NIC 1) foram considerados como regressão parcial. Foram incluídos 116 casos de NIC2, a media de idade foi de 33,95± 10,58. O desfecho clínico de um ano foi definido 43,9% por seguimento e 53,5% por peça de tratamento excisional. A regressão ocorreu em 49,1% dos casos (parcial-26,72% e completa-22,4%) a persistência foi observada em 33,62% e a progressão foi identificada em 13,8% dos casos. Houve perda de seguimento de 2,59% (3 casos) O DNA está sendo extraído do bloco de parafina para realização de genotipagem do HPV por amplificação por PCR e avaliação dos casos positivos por sequenciamento. 77 casos já tiveram o DNA extraído, destes 42 já foram amplificados e 13 casos foram enviados para plataforma de sequenciamento. Esta etapa do projeto ainda encontra-se em andamento. ?

Bolsista: Ruam Alexandre Ferreira Costa
Orientador(a): SUZETE RODRIGUES GOMES
Coorientador(a): Não informado
Resumo: Moluscos terrestres estão classificados na classe Gastropoda, a única do filo com representantes encontrados no ambiente terrestre, estando representados por lesmas, semi-lesmas e caracóis. Várias espécies têm sido introduzidas nos países, especialmente através da importação de produtos agrícolas. Algumas possuem comportamento invasor, sendo de difícil controle, causando danos importantes em ambientes agrícolas e urbanos, oferecendo riscos à saúde humana e veterinária. O caracol gigante africano Achatina fulica é hoje uma destas espécies, sendo encontrada em praticamente todos os continentes e considerada uma das piores 100 espécies invasoras no mundo. No Brasil é encontrada em praticamente todos os Estados. O objetivo deste projeto é avaliar que cultivos já foram reportados na literatura com infestações por A. fulica, bem como que metodologias de vigilância e controle tem sido propostas para a espécie. Serão considerados artigos publicados nos últimos 50 anos no mundo. A busca pelas publicações será realizada nas bases de dados Scientific Electronic Library Online (SciELO), Scopus (Elsevier), Literatura Latino-Americana e do Caribe em Ciências da Saúde (LILACS), Publicações Médicas (PubMed) e Google Acadêmico. Após a obtenção da amostra final, os artigos serão qualificados, seguindo a metodologia Prisma. Serão incluídos no estudo os artigos que mencionem algum tipo de controle e/ou algum tipo de infestação em área agrícola. A partir destes artigos serão avaliados os cultivos atacados nos diferentes continentes e países, danos causados pelos moluscos nos mesmos, tipo de ambiente onde o estudo foi desenvolvido (agrícola, urbana, laboratório) e metodologias de controle (físico, químico, biológico, integrado), ao longo dos últimos 50 anos. Espera-se que os dados gerados possam embasar ações de vigilância e controle desta espécie e de seus nematódeos associados.

Bolsista: Laura de Luna Katona
Orientador(a): SIMONE SANTOS SILVA OLIVEIRA
Coorientador(a): Sergio Luiz Dias Portella
Resumo: A pesquisa proposta trata das tragédias socioambientais dos rompimentos das barragens do Fundão (empresa Samarco/Mariana, MG) e do Córrego do Feijão (empresa Vale/Brumadinho, MG) buscando dar destaque à visão dos atingidos, através da análise do discurso expressa em mídia aderente e alternativa do jornal A Sirene em contraposição aos discursos da grande mídia (Jornal O Globo) e das instituições oficiais da reparação (Fundação Renova). Para isso, pesquisa irá levantar e sistematizar as matérias publicadas dos jornais A Sirene e O Globo; descrever as produções de sentidos envolvidas nas práticas discursivas dos atingidos através do material disponível pelo jornal A Sirene, assim como dos grandes jornais e suas fórmulas cristalizadas de abordagem; Identificar os discursos dominantes e os discursos de resistência, evidenciando as formas de apagamento praticadas pelas narrativas dominantes e suas relações de apagamento das narrativas de resistência. A análise se iniciou com a leitura horizontal do material selecionado, onde foram anotadas as primeiras pistas discursivas e suas controvérsias. A próxima fase da pesquisa busca compreender as condições de produção do discurso técnico-científico apresentado tanto no Jornal A Sirene como no site de referência da Fundação Renova e nas peças publicitárias e de divulgação das empresas e, especialmente, na mídia tradicional. Nesta etapa da pesquisa para aprofundar a compreensão das controvérsias de discursos também estão sendo levantadas as matérias da grande mídia, especialmente do jornal O Globo, no período estudado com relação ao tema da pesquisa maior. Para efetuar o levantamento dessas matérias, foi criada uma linha do tempo com os principais acontecimentos decorrentes do rompimento das barragens estudadas, utilizando como referência, principalmente, o site do Ministério Público Federal (MPF), e pesquisando tanto no Jornal O Globo, quanto no Jornal A Sirene as matérias dentro do mesmo espaço temporal. Considerando o levantamento dos dados do jornal O Globo, desde 2016 até 2021, são 73 edições. Dentre essas 73 edições, foram selecionadas as matérias que abordavam o rompimento da barragem do Fundão ou algum fator decorrente. Foram selecionadas cerca de 61 matérias até o atual momento. O levantamento continuará usufruindo da linha do tempo construída para buscar em outras datas marcantes qual foi a perspectiva abordada pela grande mídia para, então, colocar em contraponto com a concepção apresentada pela pequena mídia local, no caso específico, o levantamento feito do jornal A Sirene.

Bolsista: VINICIUS VERAS E SILVA
Orientador(a): ALOYSIO DA SILVA FERRAO FILHO
Coorientador(a): Não informado
Resumo: Os ecossistemas aquáticos vêm sofrendo grande impacto antrópico ao longo das últimas décadas, com a introdução de substâncias de origem diversa, assim como matéria orgânica de origem doméstica e substâncias sintéticas de origem industrial. Isto tem levado a um intenso comprometimento da dinâmica das comunidades naturais, devido ao crescente processo de eutrofização artificial, com consequente aumento na produtividade e alterações na estrutura das comunidades aquáticas, como o aparecimento florações de cianobactérias. Vários gêneros de cianobactérias que formam florações produzem toxinas. As toxinas de cianobactérias, que são conhecidas como cianotoxinas, constituem uma grande fonte de produtos naturais tóxicos produzidos por esses microorganismos. Algumas dessas toxinas, que são caracterizadas como neurotoxinas por sua ação rápida, causam a morte por parada respiratória após poucos minutos de exposição. Outras atuam menos rapidamente e são identificadas como peptídeos ou alcalóides hepatotóxicos. Os microplásticos são outro tipo de problema que vem impactando os ecossistemas aquáticos, tanto de água doce quanto marinhos, podendo se acumular nas cadeias alimentares e causar efeitos no crescimento e na reprodução de organismos aquáticos. O gênero Daphnia, alocado dentro da família Daphnidae (Ordem Cladocera), possui espécies consideradas como sentinelas dos ecossistemas aquáticos de água doce, uma vez que possui uma grande sensibilidade em relação à presença de poluentes. Deste modo, o presente projeto pretende testar o efeito conjunto entre cianobactérias e microplásticos em microcrustáceos filtradores, avaliando o sinergismo dos efeitos prejudiciais de ambos sobre a fisiologia dos organismos testados.

Bolsista: MARIA GUEDES BORGES
Orientador(a): LEONARDO JOSE DE MOURA CARVALHO
Coorientador(a): FABIANA GOMES DA CONCEICAO
Resumo: O Programa Nacional de Controle de Malária adotou estratégia de eliminação de malária por Plasmodium falciparum no Brasil. A eliminação de P. vivax, espécie mais prevalente no país (89% dos mais de 157 mil casos de malária em 2019) é mais complicada, pois esse parasita apresenta obstáculos como a gametocitemia precoce e, principalmente, a existência de formas latentes – os hipnozoítas, responsáveis por recaídas. A primaquina, droga disponível para tratar hipnozoítas, tem apresentado alarmante falha terapêutica. Além disso, a primaquina e a nova droga tafenoquina podem causar hemólise aguda em pacientes com deficiência de glicose-6-fosfato desidrogenase (G6PD). Assim, o objetivo deste projeto é avaliar novos fármacos anti-hipnozoítas de baixa hemotoxicidade, modificados para concentração em hepatócitos, e inibidores de enzimas de P. vivax. Para isso, modificações estruturais na primaquina e na tafenoquina através de química medicinal, ou através de engenharia de nanopartículas conjugadas com açucares com direcionamento aos hepatócitos, serão utilizadas para gerar novos fármacos que mantenham a atividade anti-hipnozoíta mas percam a capacidade de induzir hemólise através de estresse oxidativo. A atividade hemolítica das drogas selecionadas será avaliada in vitro com a utilização de hemácias humanas de indivíduos deficientes em G6PD, e in vivo com o uso de camundongos deficientes nessa enzima. Estudos farmacocinéticos e de biodistribuição irão determinar a concentração dessas drogas, por HPLC, em diferentes tecidos e em diferentes tempos e avaliar se a estratégia de direcionamento a hepatócitos funciona. A geração de novas moléculas anti-hipnozoítas seguras e eficazes é fundamental para uma política de controle efetivo e de eliminação de malária por P. vivax.