Revista Eletrônica do Programa de Bolsas - Edição 1

Bolsista: MARINA MACEDO GOMES
Orientador(a): ALZIRA MARIA PAIVA DE ALMEIDA
Resumo: Levantamento de ocorrência de ectoparasitas envolvidos na transmissão de Yersinia pestis no estado de Pernambuco entre 1995 a 2005. A peste é uma zoonose de roedores silvestres, transmitida por pulgas, que pode infectar outros mamíferos, inclusive humanos. A zoonose permanece endêmica em alguns países e um potencial causador de emergência de saúde pública de interesse nacional (ESPIN) ou internacional (ESPII) fazendo-se necessária a vigilância ativa das áreas focais e a manutenção de equipes treinadas para situações de emergência. Compreender a dinâmica da peste em diferentes ecossistemas e contextos sociais é fundamental para estabelecer estratégias de vigilância eficazes, capazes de reconhecer eventos que podem preceder o acometimento das populações humanas, como por exemplo aumento das populações de roedores/hospedeiros e pulgas/vetores, epizootias dos roedores e outros. Nesse sentido, o objetivo do estudo foi descrever as informações bióticas sobre as populações de ectoparasitos encontrados em hospedeiros nas áreas historicamente focais de transmissão na Chapada do Araripe no sertão Pernambucano. Foi realizado um estudo descritivo com abordagem quantitativa a partir de informações contidas no acervo do Serviço de Referência Nacional em Peste do Instituto Aggeu Magalhães - FIOCRUZ PE por meio de dados obtidos pelo Programa de Controle da Peste no estado de Pernambuco no período de 1995 a 2005. No período analisado o roedor sinantrópico comensal Rattus rattus apresentou maior prevalência do que as espécies silvestres (Necromys lasiurus, Galea spixii e Thrichomys laurentius, Calomys expulsus, Cerradomys langguthi, Oligoryzomys nigripes e Wiedomys pirhorrohinus), sendo a menor frequência de capturas do pequeno marsupial Monodelphis domestica que forneceu apenas 0,02% das capturas e não hospedava nenhuma pulga. Tanto o R. rattus quanto todas as espécies de roedores silvestres, hospedavam pulgas ectoparasitas das espécies Polygenis tripus, P. b. jordani e Ctenocephalides felis. A Xenopsylla cheopis foi encontrada parasitando principalmente o R. rattus e em menor frequência as espécies silvestres exceto W. pirhorrohinus e O. nigripes. A ocorrência da P. irritans foi praticamente excepcional, apenas um espécime foi encontrado em um roedor T. laurentius e forneceu apenas 0,01% total de pulgas coletadas no período. Foi observada flutuação na frequência de animais (roedores e pulgas) obtidos em relação aos meses dos anos, com elevação na quantidade de roedores capturados nos meses de junho a outubro. Os resultados mostraram uma redução do número de roedores e pulgas ectoparasitas, e os índices totais de pulgas (número total de pulgas/número total de roedores) ficaram <1, valor inferior ao índice considerado como fator de risco para peste (>1). Embora a maior quantidade de animais obtidos (roedores e pulgas) tenha sido originada do município de Exu seguido de Bodocó, Serrita, Granito, Cedro e Moreilândia a relação parasito/hospedeiro revelou maiores índices de pulgas (>1) nos municípios Cedro, Moreilândia e Exu e índices mais baixos (<1) nos municípios de Bodocó, Granito e Serrita. A abundância do roedor comensal (R. rattus) pode levar a uma maior exposição das populações humanas, especialmente considerando sua proximidade com os humanos favorecendo a propagação da peste e outras doenças transmitidas por esses roedores. Apesar da alta prevalência desses roedores a infecção não foi detectada na área estudada podendo-se atribuir aos baixos índices de pulgas no período.

Bolsista: AGNES REZENDE LAGE
Orientador(a): SIMONE MORAIS DA COSTA
Resumo: Em março de 2020, a Organização Mundial da Saúde declarou a pandemia da COVID-19, tornando uma prioridade o desenvolvimento de vacinas contra essa doença. Desde seu surgimento em dezembro de 2019 até meados de abril deste ano, foram confirmados mais que 6,8 milhões de mortes em todo o mundo. O agente etiológico da COVID-19, o Coronavírus da Síndrome Respiratória Aguda Grave 2 (SARS-CoV-2), é um vírus envelopado, com um genoma de RNA fita simples, com polaridade positiva, que codifica 16 proteínas não estruturais (nsp1–16), 9 proteínas acessórias e 4 proteínas estruturais: as proteínas da espícula ou spike (S), membrana (M) e envelope (E), que estão inseridas no envelope viral e a proteína do nucleocapsídeo (N) que se encontra associada ao RNA, formando o nucleocapsídeo. A proteína S medeia a ligação do vírus ao receptor celular, a proteína ECA-2, e promove a fusão do envelope viral com a membrana celular. Devido ao seu papel crítico durante a infecção viral, a proteína S é o principal alvo das vacinas contra a COVID-19. Como o SARS-CoV-2 continua se propagando mundialmente, diversas variantes virais vêm surgindo continuamente. Essas novas variantes acumulam mutações principalmente na proteína S, que podem ter implicações nas taxas de infecção viral, com alteração da afinidade de ligação da proteína S ao receptor celular. Assim, algumas variantes de SARS-CoV-2 são consideradas variantes de preocupação, devido ao risco de transmissão generalizada e possível evasão da resposta imune induzida pelas vacinas em uso ou por infecções prévias com outras variantes, com impacto na saúde pública. Uma possiblidade para melhorar a eficácia das vacinas frente ao surgimento de novas variantes é a utilização de outros alvos antigênicos para a construção de vacinas contra COVID-19. Alguns autores sugerem que a proteína N é um bom antígeno para compor uma vacina. Essa proteína se liga ao RNA viral, constituindo o nucleocapsídeo e está envolvida em alguns aspectos do ciclo viral. A proteína N é uma proteína conservada entre os coronavírus e é produzida em grande quantidade durante a infecção, sendo um alvo importante tanto da resposta imune humoral, quanto da resposta de células T. Considerando a emergência de se estudar as proteínas de SARS-CoV-2 e de desenvolver novas gerações de vacinas baseadas em diferentes antígenos virais e plataformas vacinais, esse projeto tem como objetivo a construção e avaliação de vacinas de DNA contendo o gene N de SARS-CoV-2. Inicialmente foi desenhada uma sequência codificando a proteína N de SARS-CoV-2 e um peptídeo sinal heterólogo, que foi otimizada para expressão em células humana e clonada no plasmídeo pVAX1. Bactérias E. coli foram transformadas com o plasmídeo recombinante, pCOV-NDelta, e os clones foram avaliados por digestão do plasmídeo com enzimas de restrição e sequenciamento do fragmento clonado. A expressão da proteína N em células BHK-12 e HEK-293T trasfectadas com o plasmídeo pCOV-NDelta foi confirmada por imunofluorescência. Pretendemos avaliar a secreção da proteína N e inocular camundongos com esse plasmídeo para a análise da resposta imune induzida. Além disso, considerando os estudos de vacinas de DNA contra SARS-CoV que observaram que a retirada da sequência que codifica a porção N-terminal da proteína N levou ao aumento da resposta imune, também desenhamos um plasmídeo contendo a sequência que codifica a porção C-terminal da proteína N de SARS-CoV-2. Esse plasmídeo será utilizado para transformar bactérias E. coli. Os clones recombinantes serão avaliados e, após confirmação da expressão e secreção da porção C-terminal da proteína N, o plasmídeo pCOV-N1Delta também será avaliado em modelo murino.

Bolsista: KAMYLLE CYNNARA TAVARES DA SILVA
Orientador(a): TEREZA CRISTINA LEAL BALBINO
Resumo: O sistema CRISPR/Cas corresponde a um mecanismo adaptativo de defesa encontrado em arqueas e bactérias, formado por dois elementos principais: o locus CRISPR e as proteínas Cas. O locus CRISPR é composto por sequências repetidas interespaçadas por espaçadores provenientes de elementos genéticos móveis. Para o funcionamento desse sistema, são necessárias três etapas principais: adaptação, onde ocorre o primeiro contato com o DNA exógeno e incorporação do espaçador no locus CRISPR; expressão, etapa em que ocorrem a transcrição e tradução de proteínas Cas; e a interferência, etapa em que ocorre o reconhecimento e degradação de moléculas de DNA invasoras. Pseudomonas aeruginosa é um patógeno oportunista, associado principalmente a infecções hospitalares, com alta capacidade de adquirir mecanismos de resistência a antimicrobianos e produzir biofilme. Como infecções por P. aeruginosa são frequentemente resistentes a várias classes de antimicrobianos usados na clínica, e pela dificuldade de fármacos penetrarem na matriz polimérica do biofilme, tem-se buscado desenvolver estratégias alternativas para o combate deste microrganismo, como o uso de fagoterapia. Sistemas CRISPR/Cas do tipo I, subtipos F e E, foram encontrados em estudos prévios do grupo de pesquisa. A funcionalidade e regulação desse sistema nesta espécie ainda não é bem esclarecida. Diante do exposto, os resultados obtidos permitirão compreender os diferentes mecanismos dos sistemas CRISPR/Cas utilizados por este microrganismo, e auxiliarão na compreensão da possível interferência da maquinaria na multirresistência bacteriana. O projeto tem como objetivo geral investigar mecanismos regulatórios do sistema CRISPR/Cas em isolados clínicos de P. aeruginosa. Os objetivos específicos são avaliar quantitativamente a expressão de genes relacionados aos sistemas CRISPR/Cas, Quorum Sensing e genes de ativação de biofilme KinB/AlgB de forma constitutiva e após deleção do Sistema CRISPR/Cas, em isolados sob condições de migração. Para isso, serão utilizados dois isolados clínicos de P. aeruginosa CRISPR/Cas positivos, representativos dos subtipos I-F e I-E. O experimento de migração bacteriana será realizado de acordo com Chabas et al. (2016), no qual os dois isolados serão inoculados em meio mínimo M9 suplementado com 0,2% de glicose, junto com um plasmídio contendo uma sequência espaçadora presente nos isolados clínicos em estudo. Paralelamente, o mesmo isolado será incubado no mesmo meio, porém sem o plasmídio. Durante cinco dias as culturas serão transferidas para um novo meio simulando uma baixa ou alta taxa de migração. Ao final do experimento as culturas serão submetidas à técnica de qPCR (Real-Time Quantitative Reverse Transcription PCR). Para realizar a análise quantitativa da expressão gênica serão investigados os genes cas1f e csy1 (subtipo I-F), e cas1e e cse4 (subtipo I-E). Os genes algB e amrZ serão utilizados na investigação da produção de biofilme, e os genes lasI, lasR, rhlI e rhlR serão utilizados para avaliar o mecanismo de Quorum sensing. Como controle endógeno da reação, será utilizado o gene constitutivo rpsL de P. aeruginosa.

Bolsista: ALAN JOSE ALCANTARA DE FIGUEIREDO JUNIOR
Orientador(a): Guilherme de Sousa Ribeiro
Resumo: Estima-se que cerca de 40 por cento das pessoas acometidas por chikungunya desenvolvam dores articulares crônicas, com duração de três meses a alguns anos. Como consequência, pode haver prejuízo da saúde mental e diminuição da capacidade funcional. Esse estudo tem o objetivo de estimar a incidência de infecção pelo vírus chikungunya em suas diferentes formas clínicas (assintomática, sintomática com evolução não crônica da dor articular e sintomática com evolução crônica da dor articular) e avaliar o impacto da cronificação da artralgia na produtividade laboral, prática de atividade física, saúde mental e qualidade de vida. Para atender aos objetivos, realizou-se um estudo de coorte prospectivo em uma comunidade de Salvador, Bahia. O soroinquérito de base foi realizado entre set-nov/2019 e o de seguimento entre out-dez/2020. Contatos telefônicos quinzenais foram realizados entre os inquéritos para identificar episódios de febre e dor articular. Os critérios de inclusão foram: dormir pelo menos três noites por semana no domicílio, ter idade > ou = 6 meses e não ter déficit cognitivo ou de comunicação. A inclusão dos participantes foi realizada por meio de seleção aleatória de domicílios e inclusão de voluntários. Foi estimado um tamanho amostral de 600 participantes e foram inclusos 606 participantes. Nos dois inquéritos, foram realizadas entrevistas para coleta de dados sociodemográficos e clínicos e aplicados questionários validados para mensurar a prática de atividade física, o prejuízo da produtividade laboral, a qualidade de vida e a saúde mental. Durante os soroinquéritos, coletou-se amostras de sangue para verificar a presença de anticorpos IgM e IgG específicos contra o vírus chikungunya (CHIKV) por meio de ELISA (Inbios, Seattle, EUA e Euroimmun, Luebeck, Alemanha, respectivamente). Serão considerados casos prevalentes de infecção pelo CHIKV aqueles que apresentarem IgM e/ou IgG contra CHIKV nas amostras obtidas na linha de base. Serão considerados casos incidentes os que tiveram apresentarem soroconversão de IgM ou IgG entre os dois soroinquéritos. Serão considerados casos de infecção sintomática, os casos incidentes que: 1) relatarem febre e artralgia durante as ligações telefônicas quinzenais realizadas no período entre os inquéritos; 2) relatarem artralgia sem febre desde que não houvesse doença musculoesquelética prévia; ou 3) relatarem febre sem artralgia desde que a febre não possa ser explicada por uma infecção pelo SARS-CoV-2 durante o seguimento (febre anterior à pandemia de COVID-19 (até primeira quinzena de mar/2020) ou ELISA IgG para SARS-CoV-2 não reagente no soroinquérito de 2020). Os casos de infecção sintomática serão considerados como sintomáticos crônicos quando referirem que a dor articular teve duração maior que 90 dias. A caracterização dos participantes será realizada por frequências absolutas e relativas e medidas de tendência central e dispersão. Indicadores de prevalência com intervalos de confiança de 95 por cento serão calculados para descrever a incidência de infecção pelo CHIKV em suas diversas formas clínicas. Para comparar a prática de atividade física, produtividade, qualidade de vida e saúde mental dos participantes de acordo com o status clínico-imunológico da infecção (negativos durante o seguimento; com infecção assintomática; com infecção sintomática e sem evolução para artralgia crônica; e com infecção sintomática e evolução para artralgia crônica) serão realizados regressão linear ou regressão de Poisson (a depender do tipo de variável de desfecho) com ajuste para sexo, idade e para agregação domiciliar dos dados. O projeto foi aprovado pelo Comitê de Ética em Pesquisa do IGM-Fiocruz, sob parecer 4.315.730. Considerando o contexto endêmico da chikungunya, este trabalho poderá orientar profissionais de saúde e gestores sobre grupos com maior risco de desenvolver artralgia crônica e possibilitar intervenção oportuna para minimizar os efeitos negativos sobre a saúde dos acometidos.

Bolsista: Juliana Oliveira da Mata
Orientador(a): EDWARD JOSE DE OLIVEIRA
Resumo: Neste trabalho, estamos avaliando o desempenho das técnicas de Kato-Katz, Helmintex (HTX), PCR-ELISA e PCR em tempo real (qPCR) para o diagnóstico da esquistossomose intestinal nas populações de Malacacheta, MG e Conde, BA. Na população de Malacacheta, vinte e duas amostras (22/400) foram positivas pela técnica de Kato-Katz, 66/400 amostras foram positivas pelo PCR-ELISA e 67/400 apresentaram resultados positivos pelo qPCR, resultando taxas de positividade de 5,5% (3,4-8,3), 16,5% (12,8-21%) e 16,75 % (13-21,3), respectivamente. O PCR-ELISA e o qPCR apresentaram sensibilidade de 96% e especificidade de 92% e 94%, quando aplicado em amostras de fezes da população de Malacacheta. A acurácia obtida pelo qPCR (94%) foi discretamente maior que a do PCR-ELISA (92%), mas sem diferença estatisticamente significante (p= 0,77), baseado na análise de classes latentes. Em razão de falta de estabilidade dos reagentes, não foi possível aplicar o PCR-ELISA nas amostras de urina da população de Malacacheta. Das 400 amostras de urina 24 (6%) e 18 (4,5%) foram positivas para a presença de DNA de S. mansoni pelo PCR convencional (cPCR) e pelo qPCR, respectivamente. As taxas de sensibilidade obtidas, usando amostras de urina, foram de 6% pelo cPCR e 13% para o qPCR. O estudo está em andamento na população de Conde, BA. Nesta população, 93/271, 115/254 e 56/241 amostras de fezes foram positivas pela técnica de Kato-Katz, HTX e qPCR, resultando em taxas de positividade de 34,3%, 45,3% e 23,2%, respectivamente. Os resultados obtidos por este estudo poderão embasar tomadas de decisão para a incorporação de novas técnicas de diagnóstico da esquistossomose intestinal pelo Ministério da Saúde.

Bolsista: SORAYA DE OLIVEIRA DA SILVA SANTOS
Orientador(a): THADEU ESTEVAM MOREIRA MARAMALDO COSTA
Resumo: A senescência celular é um fenômeno fisiológico associado ao envelhecimento caracterizado pela suspensão da proliferação celular. As células senescentes apresentam como características como: aumento de tamanho, da expressão da enzima beta-galactosidase e das proteínas p21 e p53 (envolvidas na regulação do ciclo celular), além de um perfil secretório caracterizado pela liberação de mediadores pró-inflamatórios como IL-6, IP-10, CCL2 e VEGF. A permanência de células senescentes no organismo por longos períodos contribui para o estabelecimento de uma inflamação crônica “estéril”, condição responsável pelo desenvolvimento de doenças associadas ao envelhecimento e de tumores. Assim, a descoberta e/ou desenvolvimento de substâncias que tenham como alvo as células senescentes podem ter um importante papel na prevenção e no tratamento de doenças associadas ao envelhecimento, promovendo um aumento na saúde e longevidade. A proteína do choque térmico 90, HSP90 é uma chaperona molecular responsável pela estabilidade de muitas proteínas celulares, incluindo as envolvidas no processo de senescência. Por este motivo, vem sendo apontada como um possível alvo para a eliminação de células senescentes. De fato, estudos recentes já demonstraram que a inibição da HSP90 foi capaz de aumentar o tempo de vida de C. elegans e retardou o início de fenótipos associados ao envelhecimento em fibroblastos e camundongos deficientes na enzima de reparo de DNA ERCC1 (Ercc1-/-). Desta forma, considerando a participação da HSP90 no processo de senescência e os efeitos cumulativos desta sobre o surgimento de doenças crônicas degenerativas associadas ao envelhecimento, a caracterização da atividade da HSP90 na senescência utilizando inibidores farmacológicos é de extrema importância.