Revista Eletrônica do Programa de Bolsas - Edição ZERO

Bolsista: PAOLA LUGATO BAPTISTA
Orientador(a): HELENE SANTOS BARBOSA
Resumo: O Toxoplasma gondii é o agente causador da toxoplasmose, doença infecciosa que afeta mais de 30% da população mundial. Esta doença pode afetar todos os animais de sangue quente, incluindo humanos. Ademais, a formação de cistos teciduais do parasito se dá preferencialmente no sistema nervoso e no tecido muscular esquelético. Mesmo em imunocompetentes, seja por infecção recente ou pela reativação dos cistos teciduais, podem ocorrer miosites no músculo esquelético. Apesar da descrição de casos de miosite pela infecção na literatura, ainda não está claro de que forma o T. gondii pode influenciar na fisiologia do músculo esquelético. A célula muscular esquelética é rica em mitocôndrias, e ainda não se sabe como a manipulação dessa organela pelo parasito é capaz de influenciar seu metabolismo energético, tão relevante neste tipo celular. Por essa razão, o objetivo do trabalho é avaliar a fisiologia mitocondrial de células musculares esqueléticas durante a infecção. Para isso, a linhagem celular de mioblasto murino C2C12 foi infectada com cepas de T. gondii tipo I, II e III (RH, Me49 e VEG, respectivamente) por 24 h. Primeiramente, foi aferida a taxa de infecção de cada uma das cepas em diferentes MOI (multiplicidade de infecção), afim de decidir a melhor proporção parasito-célula para os ensaios experimentais. Para a infecção de mioblastos foram selecionados os MOI de 5:1 para a cepa RH e de 10:1 para as cepas VEG e Me49, cuja taxa de infecção foi de aproximadamente 15%. Para a cultura de miotubos, obtidos após indução da diferenciação por 5 dias, foram os MOI 3:1, 5:1 e 10:1 para RH, VEG e Me49, respectivamente, com infecção de aproximadamente 20%. Os experimentos foram repetidos 2 vezes com lamínulas em triplicata e a montagem do terceiro experimento está em andamento para análise e discussão finais. Ensaios pilotos para avaliar a estrutura da rede mitocondrial em células infectadas com T. gondii estão sendo padronizados por imunofluorescência para a proteína Tomm20, para as formas taquizoítas com anticorpo anti-p30 e os núcleos evidenciados com DAPI. A aquisição das imagens está sendo realizada em microscópio Confocal e a avaliação desse experimento será por meio do plug-in Mito-Morphology. Ademais, o método de qRT-PCR será utilizado com o objetivo de avaliar a expressão gênica de marcadores da dinâmica mitocondrial. Os resultados provenientes deste projeto contribuirão para o melhor entendimento da patogenia da toxoplasmose, seus impactos na fisiologia muscular, e os mecanismos pelos quais o parasito manipula a célula hospedeira para garantir o sucesso da infecção.

Bolsista: Renan Carvalho Miranda de Mello
Orientador(a): Simone Chinicz Cohen
Resumo: O nível de impacto sobre a diversidade de peixes devido a intensa ação do homem que destrói o habitat, introduz espécies exóticas e provoca alterações ambientais mudando o percurso natural das águas. O stress provocado nos peixes em consequência dos processos de degradação ambiental pode contribuir para o aumento do número de espécies parasitas com ciclo de vida direto como os Monogenoidea, provocando grandes danos à população de peixes. Os Monogenoidea são parasitos de peixes, encontrados principalmente nas brânquias, que apresentam ciclo de vida direto, alta diversidade de espécies e uma grande especificidade de hospedeiro. A taxonomia e sistemática sustentam todas as pesquisas em ecologia e evolução, bem como áreas de ciências aplicadas, como pesca e aquicultura, sendo necessário descobrir os parasitos e caracteriza-los corretamente. Considerando essas premissas, o objetivo do projeto é o estudo da diversidade de Monogenoidea parasitos de peixes provenientes de duas bacias hidrográficas brasileiras, rio Tocantins, estado do Maranhão e rio Juruá, estado do Acre. Serão avaliados exemplares de diferentes espécies obtidos nessas localidades para coleta dos parasitos. A presença dos parasitos pode comprometer a vitalidade dos peixes ou pode ameaçar o valor de venda dos mesmos pelos pescadores. Em águas naturais, há um equilíbrio entre a população hospedeira e a parasita, mas em condições de piscicultura intensiva, esses helmintos podem causar grandes danos aos peixes ou mesmo levá-los à morte, já que induzem à uma excessiva produção de muco nos filamentos branquiais, diminuindo sensivelmente as taxas respiratórias e de crescimento, podendo até afetar seus processos reprodutivos. O advento do sequenciamento de DNA proporcio¬nou, nas últimas décadas, a criação de bancos de dados genéticos visando reunir e disponibilizar, gratuitamente, informações genéticas de táxons do mundo todo. Essas coleções de sequências de DNA têm contribuído para a realização de pesquisas em diversas áreas, dentre elas taxonomia, sistemática, biologia da conservação e ecologia. Nas últimas décadas, o uso de ferramentas moleculares para identificação de espécies deu origem a uma nova linha de pesquisa em biologia, a taxonomia molecular. Os estudos moleculares têm mostrado ser uteis como critérios diagnósticos para os parasitos Monogenoidea e para reconhecer espécies similares geneticamente detectadas. Os estudos de taxonomia integrativa, propõem a utilização combinada de diferentes abordagens para reconhecer e delimitar espécies e dentro desse contexto, qualquer informação que contribua para esse objetivo é considerada de grande utilidade para a taxonomia. Foram examinados exemplares de peixes provenientes do rio Tocantins, estado do Maranhão e rio Juruá, estado do Acre. A captura foi realizada por equipes parceiras nessas localidades. Os peixes capturados foram levados para o laboratório para serem examinados e registrados os dados biométricos. As brânquias foram removidas e fixadas em álcool 70% e serão examinadas posteriormente para coleta dos parasitos. No Laboratório de Helmintos Parasitos de Peixes (LHPP), do Instituto Oswaldo Cruz, no Rio de Janeiro, os filamentos branquiais serão raspados e os Monogenoidea serão coletados e processados para o estudo, com montagem em lâminas, que serão depositadas em coleções especializadas. Os espécimes serão estudados em microscópio de luz, ilustrados com auxílio de um tubo de desenho acoplado ao microscópio e medidos com ocular micrométrica. Parte do material terá o DNA genômico extraído, sua concentração mensurada por espectrofotometria e as amplificações das regiões do gene serão realizadas por meio da reação em cadeia de polimerase (PCR). As reações de ciclo do sequenciamento serão realizadas e o sequenciamento será executado na Plataforma de Sequenciamento de DNA, na rede de plataformas tecnológicas do Instituto Oswaldo Cruz, FIOCRUZ, Rio de Janeiro, RJ. As sequencias geradas serão analisadas e editadas com programas específicos e o alinhamento e obtenção da sequência consenso será comparada com as depositadas no GenBank, realizando a análise de similaridade e serão identificadas utilizando ferramentas disponíveis na internet.

Bolsista: Maria Victoria de Jesus Mesquita Palazzo
Orientador(a): Cristiano Siqueira Boccolini
Resumo: Introdução: O uso da medicina complementar, conhecida como Práticas Integrativas e Complementares em Saúde (PICS), tem crescido no mundo e o Brasil é referência mundial como um dos países que possuem políticas específicas desenhadas para uso da medicina complementar. A prevalência do uso de PICS no Brasil é de cerca de 5% o que representa uma população de mais de 7 milhões de adultos. A Covid-19 foi um momento de grande ansiedade e medo face às incertezas relacionadas a pandemia e suas consequências como o isolamento social, mudanças bruscas na rotina de trabalho e familiar, perdas de familiares, maior exposição dos profissionais de saúde, entre outros. Objetivo: Avaliar o uso de PICS durante o período de isolamento social decorrente da pandemia da Covid-19, discriminando o uso para promoção da saúde e do bem-estar e para o combate aos sinais e sintomas decorrentes da mesma. Metodologia: Trata-se de inquérito epidemiológico de base populacional conduzido por meio eletrônico para avaliação do uso de Práticas Integrativas e Complementares em Saúde entre adultos durante a pandemia por Covid-19. Os dados coletados eletronicamente passaram por um processo de pós-estratificação para refeletir a estrutura populacional, considerando-se a macrorregião de residência, idade, raça/cor da pele e escolaridade. Um processo de ponderação foi aplicado para cada observação e todas as estimativas foram realizadas considerando o peso amostral. Foram estimadas a prevalência e intervalo de confiança de cada covariável. Resultados: A população de estudo foi formada por 12.136 indivíduos, sendo composta, em maior frequência, por participantes do sexo feminino, com idade inferior a 40 anos, de cor/raça branca, alto nível de escolaridade e com companheiro(a) ou cônjuge. Entre os participantes, a maioria não apresentou mudanças no status de ocupação durante a pandemia de Covid19, continuando suas atividades ocupacionais presencialmente ou em casa (home office). Quase 30% não possuía emprego antes da pandemia e permaneceu sem ocupação. A prevalência de uso de PICS foi de 61,75% na população de estudo, sendo que quase 24,5% dos participantes usam quatro ou mais PICS. Em relação ao tipo de PICS, as mais utilizadas foram: meditação (28,21%), fitoterapia (28,19%), reiki (21,70%), aromaterapia (16,5%) e homeopatia (14,58%).

Bolsista: Evandro Augusto Rubert Roza
Orientador(a): LETICIA CAVALARI PINHEIRO
Resumo: JUSTIFICATIVA E RELEVÂNCIA O envelhecimento populacional, que vem ocorrendo há mais de um século nos países desenvolvidos, começou mais recentemente em países de baixa e média renda e de forma bastante acelerada (1). No Brasil, país com mais de 200 milhões de habitantes que está entre os que mais envelhecem demograficamente no mundo (2), os desafios trazidos por esse rápido envelhecimento populacional têm sido motivo de preocupação no campo da saúde pública. Dados de estudos em grande escala com foco na população idosa do país têm potencial de subsidiar políticas voltadas a melhorias na qualidade de vida dessa população. Dados brutos resultantes de grandes estudos na área de saúde costumam ser inacessíveis ao público em geral e podem ser subexplorados por pesquisadores. A visualização gráfica de dados é uma importante ferramenta para extrair informações resumidas dos dados e levantar hipóteses interessantes a serem exploradas, além de permitir a divulgação desses dados de forma clara e compreensível para a população em geral. Diante deste cenário, a apresentação gráfica (visual) de dados sobre doenças relevantes na população idosa do Brasil, baseada nos grandes estudos de saúde realizados, é de grande importância para o país. OBJETIVOS Geral: Construir um painel de visualização de dados sobre Saúde Geral e Doenças na população idosa brasileira, incluindo doenças crônicas, visão e audição, quedas, fadiga e exaustão, com base nos dados do ELSI-Brasil, permitindo comparações entre sexos e faixas etárias. Específicos: - Estudar o banco de dados e as ferramentas a serem utilizadas para implementação das visualizações de dados propostas. - Selecionar indicadores relevantes relacionados ao bloco de doenças crônicas e outros blocos de doenças que constem no banco de dados do ELSI e que sejam de interesse. - Elaborar visualizações gráficas aprimoradas para cada indicador, comparando por categorias de sexo e faixa etária. - Implementar aplicação web interativa para acesso às visualizações disponíveis. METODOLOGIA Fonte de Dados Serão utilizados dados do Estudo Longitudinal de Saúde do Idoso (ELSI-Brasil) (3), estudo de coorte de base populacional, representativo para a população nacional, de pessoas com 50 anos ou mais. A linha de base do ELSI foi realizada entre 2015 e 2016, com uma amostra de 9412 pessoas em 70 municípios nas 5 macrorregiões do país. Análise Estatística Para resumir os dados e comparar entre as categorias de sexo e faixa etária, serão utilizadas medidas de prevalência. Os gráficos serão construídos de acordo com o tipo de variável, sendo mais usado o gráfico de barras. Serão utilizados os pacotes ggplot2 (4), Shiny (5), da biblioteca do software R4.1.1 (6). CRONOGRAMA Revisão Literatura: Meses 1 a 9 Organização dos dados: Meses 1 a 5 Seleção de Indicadores: Meses 2 a 6 Implementação: Meses 3 a 9 Discussão de Resultados e Ajustes: Meses 6 a 10 Divulgação de Resultados: Meses 10 a 12 REFERÊNCIAS 1 Kinsella K , Philips DR . Global Aging: The Challenge of Success . Washington, DC, Population Reference Bureau; 2005. 2 United Nations, Department of Economic and Social Affairs, Population Division. World Population Prospects: The 2015 Revision. http://esa.un.org/unpd/wpp/. 3 M F Lima-Costa, F B de Andrade, P R B de Souza Jr., A L Neri, Y A de O Duarte, E Castro-Costa, C de Oliveira, The Brazilian Longitudinal Study of Aging (ELSI-Brazil): Objectives and Design, American Journal of Epidemiology, Volume 187, Issue 7, July 2018, Pages 1345-1353, https://doi.org/10.1093/aje/kwx387 4 Wickham H (2016). ggplot2: Elegant Graphics for Data Analysis. Springer-Verlag New York. ISBN 978-3-319-24277-4, https://ggplot2.tidyverse.org. 5 W Chang, J Cheng, JJ Allaire, C Sievert, B Schloerke, Y Xie, J Allen, J McPherson, A Dipert and B Borges (2021). shiny: Web Application Framework for R. R package version 1.7.1. https://CRAN.R-project.org/package=shiny 6 R Core Team (2020). R: A language and environment for statistical computing. R Foundation for Statistical Computing, Vienna, Austria. URL https://www.R-project.org/

Bolsista: Beatriz Gomes de Souza Simões
Orientador(a): CINTIA XAVIER DE MELLO
Resumo: II - JUSTIFICATIVA E RELEVÂNCIA A leishmaniose cutânea (LC) é uma doença infecciosa, causada por parasitos do gênero Leishmania. Segundo as recomendações da OMS e do Ministério da Saúde, o local de eleição para coleta de material para diagnóstico da LC, é a borda da lesão, pois supõe-se que essa localização contenha a maior quantidade de parasitos (OMS, 2010; BRASIL, 2017). Entretanto, a dispersão dos parasitos na lesão de LC tem sido rediscutida (RAMIREZ et al., 2000, ADAMS et al., 2014; SUAREZ et al., 2015). Nosso grupo tem estudado a distribuição parasitária na lesão, de Mello et al. (2011) avaliaram 110 pacientes empregando a escarificação de lesão cutânea ulcerada observando por microscopia ótica maior sensibilidade para o procedimento realizado na borda interna da lesão. Posteriormente, Thomaz et al. 2020 avaliaram essas mesmas amostras pela qPCR e confirmaram maior carga parasitária nesse local associada a maior necrose na análise histopatológica. Alguns aspectos ainda necessitam ser estudados mais profundamente com o auxilio de outras técnicas e incluindo todos os locais da lesão como o centro da úlcera. Esse trabalho tem como objetivo avaliar a carga e a viabilidade parasitária a partir de fragmentos de tecido obtidos de borda interna, externa e centro de lesões ulceradas de LC. Os resultados obtidos podem constituir evidências para novas diretrizes nacionais na conduta diagnóstica da LC. III - OBJETIVOS Objetivo geral Quantificar a carga parasitária utilizando a técnica de qPCR, e avaliar a viabilidade de Leishmania sp pela RT-qPCR em espécimes clínicos obtidos a partir de amostras coletadas de diferentes locais de lesões ulceradas de LC. Objetivos específicos a) Realizar revisão bibliográfica sobre a distribuição parasitária na lesão ulcerada de LC; b) Realizar a extração de DNA e RNA; c) Quantificar e comparar empregando a qPCR, a carga parasitária; d) Avaliar a viabilidade parasitária empregando a RT-qPCR através dos transcritos do gene 7SLRNA a partir de fragmentos de tecidos obtidos por biópsias da borda interna, externa e centro de lesões ulceradas suspeitas de LC; e) Avaliar e correlacionar os resultados com tempo de evolução de lesão e desfecho clínico; IV – METODOLOGIA Aspectos éticos e Delineamento do estudo Este estudo possui aprovação do CEP/IOC/FIOCRUZ (30323520.4.0000.5248) e se trata de uma análise transversal de um estudo de coorte. A população do estudo será constituída de pacientes que apresentarem lesões cutâneas ulceradas sugestivas de LC atendidos no período de 06/20 até 06/23 no INI/Fiocruz. Técnicas Laboratoriais A biópsia da lesão será realizada pelo médico e será retirado um punch de 3mm da borda interna, externa e centro da lesão sob anestesia local. Os fragmentos serão acondicionados em RNA later®. Para obtenção do RNA e DNA, será utilizado o método do Trizol associado a coluna RNeasy mini Kit. O RNA será quantificado pelo nanodrop® e, posteriormente, tratado com DNase I. A transcrição reversa será realizada a partir de 2,0 µg de RNA tratado, utilizando o Superscript IV Vilo®. A quantificação absoluta da carga parasitária (qPCR) nos sítios de lesão será realizada com base em diluições seriadas da curva padrão a partir de formas promastigotas de L. Braziliensis, utilizando primers direcionados ao kDNA (Weirather et al., 2011 ). E será realizada a quantificação do gen normalizador ?-actina humana (RODRIGUES et al, 2011). Para RT-qPCR, serão utilizados 100ng de cDNA por poço em triplicata. Será realizada uma quantificação relativa e os resultados serão expressos em 2-??Ct (fold change), entre amostras da borda interna, externa e centro. Serão utilizados iniciadores que amplificam a região do gen 7SLRNA de Leishmania (ZELAZNY et al., 2005), e iniciadores que amplificam o gene de referência GAPDH. Controles negativos e controles da reação de transcrição reversa serão adicionados a cada reação realizada. Todas as reações serão realizadas em triplicata utilizando o termociclador StepOne® sistema Sybrgreen.

Bolsista: Mônica Lucas Ribeiro de Almeida
Orientador(a): FLAVIA LIMA RIBEIRO GOMES
Resumo: A malária é uma doença causada por protozoários do gênero Plasmodium e resulta em milhares de mortes a cada ano. A parasitose pode manifestar-se de forma não complicada ou evoluir para formas graves, como a malária cerebral. Esta manifestação da doença e suas sequelas neurológicas são consequências de uma resposta inflamatória desequilibrada. Os neutrófilos são componentes chaves da resposta inflamatória e representam a primeira linha de defesa do organismo, produzindo mediadores inflamatórios que amplificam a imunidade inata e modelam o desenvolvimento da resposta imune adquirida. Neutrófilos produtores de diferentes citocinas, quimiocinas e/ou que expressam receptores do tipo Toll (TLRs) distintos já foram observados em pacientes e modelos experimentais com tumores, infecções bacterianas e parasitárias. Animais resistentes e suscetíveis à infecção por Leishmania major, por exemplo, apresentam neutrófilos com fenótipos distintos. Assim, a proposta deste subprojeto é investigar o papel regulatório de neutrófilos na resposta imune e consequente curso da malária, através da análise dos diferentes perfis fenotípicos que estas células possam assumir em animais resistentes e suscetíveis à malária cerebral experimental.