Revista Eletrônica do Programa de Bolsas - Edição 1

Bolsista: THIAGO CORDEIRO PEREIRA
Orientador(a): ROSANGELA RODRIGUES E SILVA
Resumo: Na Amazônia, é comum caçar animais silvestres para alimentação. Os moradores estão longe dos centros urbanos, onde o acesso à educação, serviços de saúde, saneamento básico e água tratada é baixo ou inexistente, favorecendo as zoonoses e enteroparasitoses. Existem poucas abordagens que envolvam coleta, caracterização molecular, análise e levantamento de dados genéticos sobre as populações das espécies causadoras das equinococoses neotropicais (Echinococcus vogeli e Echinococcus oligarthra), principalmente obtidas de pacas da região amazônica do Brasil. Variabilidade genética já foi comprovada para E. granulosus sensu lato, porém, o conhecimento dessa realidade para E. vogeli, pode contribuir para programas de controle, prevenção e diagnóstico da equinococose neotropical policística (ENP). Este trabalho tem por objetivo a caracterização molecular de E. vogeli oriundos de pacas capturadas em localidades onde há relatos de casos humanos da EP. Os fígados de pacas provêm de áreas florestais entre os anos de 2016-2021. Nos fígados com lesões características de infecção por E. vogeli, foi feita a extração do DNA total. Uma região parcial do gene nuclear P29 foi utilizada para análise molecular de E. vogeli. A extração do DNA total foi feita utilizando o kit QIAmp DNA Mini Kit (QIAGEN) e os DNAs extraídos foram submetidos à PCR conforme realizado por Santos et al., (2012). Os produtos da PCR foram purificados e as sequências foram obtidas através do Sequenciamento Automático – IOC/RJ. As sequências foram editadas e comparadas com as sequências relacionadas ao E. vogeli depositadas na base de dados GenBank-NCBI. Até o momento, dezesseis amostras fazem parte deste estudo e permitiram a identificação do E. vogeli. Todas as sequências estão disponíveis para integrar estudos filogenéticos e para serem depositadas no GenBank.

Bolsista: RICHARD DE ALMEIDA LIMA
Orientador(a): ALEXANDRE DOS SANTOS DA SILVA
Resumo: Introdução: A pandemia mundial de COVID-19, doença causada pelo vírus SARS-CoV-2 tem levado a uma alta taxa de indivíduos infectados e de mortalidade, totalizando, no mundo, 457 milhões de casos notificados e 6 milhões de óbitos (dados atualizados em 13 de março de 2022). Com o aumento e expansão da infecção causada pelo SARS-CoV-2, estudos pré-clínicos in vivo, como o utilizando o modelo animal de Hamster sírio, estão sendo realizados para avaliar o espectro clínico, resposta imunológica, fatores de agravamento e de cura, bem como o provável efeito sinérgico entre a patogênese da infecção e comorbidades. Uma dessas possibilidades é o uso desses animais para avaliar o uso de anticorpos anti-SARS-CoV-2 na infecção. Trabalhos anteriores mostraram que o uso de anticorpos anti-SARS-CoV-2 produzidos em equinos pode diminuir a carga viral em cultura de células. Portanto, este projeto investigou a eficácia do uso desses anticorpos equinos anti-SARS-CoV-2 no tratamento da infecção pelo vírus SARS-CoV-2 em Hamster sírio. Métodos: Foram utilizados 63 animais, divididos em grupo controle negativo (3 animais), grupo controle positivo, grupo tratado pré-inoculação, dois grupos tratados com uma dose de anticorpos equinos anti-SARS-CoV-2 (sendo um grupo tratado com a dose de 1:6000 e outro tratado com a dose de 1:17000) e um grupo tratado com duas doses de anticorpos equinos anti-SARS-CoV-2 1:6000 (12 animais em cada grupo). Os Hamsters foram inoculados pela via intranasal com 25 ?L de 106 cópias/mL de SARS-CoV-2 (genótipo B.1.33) em cada narina, exceto grupo controle negativo e avaliados por 15 dias. Nos dias 3, 5, 10 e 15 DPI (dia pós inoculação) 3 animais de cada grupo foram anestesiados e eutanasiados por exsanguinação. Além disso, os animais foram avaliados clinicamente pela ocorrência de sinais clínicos da infecção, peso corporal e temperatura. Foram realizados ensaios hematológicos e bioquímicos do sangue, além de coletas de amostras de fezes, swab orofaríngeo, coração, pulmão, intestino e cérebro para avaliação da carga viral por RT-PCR nos dias da eutanasia. Resultados: Em relação à avaliação clínica, o grupo controle positivo apresentou significativa perda de massa corporal, enquanto os grupos tratados, excluindo-se o grupo tratado com uma alta dose (1:17000), não apresentaram significativa perda de massa corporal durante a infecção. No swab orofaríngeo, ocorreu uma diminuição da média da carga viral de SARS-CoV-2 do grupo tratado com uma alta dose (1:17000) quando comparado com os outros grupos no período inicial da infecção, ou seja, do dia 3 ao dia 5 DPI. Após o dia 5 DPI, observou-se uma diminuição da carga viral em todas as amostras, o que pode ter relação com uma diminuição da infecção. A RT-PCR do pulmão, apresentou carga viral consideravelmente menor ao longo dos dias após inoculação pelo grupo tratado pré inoculação. Não foram apresentadas variações bioquímicas e hematológicas consideráveis entre os grupos controle e os grupos tratados, somente ocorreu um aumento na taxa das transaminases oxalacética e pirúvica, tendo em vista que as mesmas são consideradas como biomarcadores para lesão hepática causada pelo SARS-CoV-2. Conclusão: Os resultados apresentados até o momento mostram que anticorpos equinos anti-SARS-CoV-2 podem ser utilizados no tratamento do SARS-CoV-2, principalmente quando tratados com alta dose de anticorpos (1:17000). Novas análises, como avaliação da carga do viral por RT-PCR do intestino, cérebro e fezes, além do teste de neutralização e isolamento viral serão realizadas para uma melhor avaliação do tratamento utilizando anticorpos equinos anti-SARS-CoV-2 em modelo animal Hamster sírio.

Bolsista: LETICIA BAIRRAL SAAVEDRA
Orientador(a): ROBERTO MAGALHAES SARAIVA
Resumo: Justificativa e Relevância: A doença de Chagas (DC) possui alta morbimortalidade. O tratamento com o benznidazol (BZ) é capaz de curar pacientes na fase aguda e tem efeitos benéficos para pacientes na fase crônica. Porém, o BZ apresenta eventos adversos (EAs) que causam a interrupção do tratamento em cerca de 30% dos casos. A farmacocinética do BZ em uso crônico em pacientes com DC no Brasil é pouco conhecida. Considerando o cenário epidemiológico, a importância dos EAs no abandono do tratamento e a falta de estudos da farmacocinética do BZ em uso crônico, há necessidade de mais estudos sobre o tema. Objetivos: Caracterizar a farmacocinética do BZ fabricado no Brasil administrado em doses múltiplas a pessoas com DC crônica na forma indeterminada conforme idade, sexo e ocorrência de EAs. Metodologia: Este estudo é unicêntrico, não-controlado, sem mascaramento, aprovado pelo CEP do INI (4.777.595), no qual foram incluídos pacientes com DC crônica na forma indeterminada entre 18 e 70 anos, de ambos os sexos e que não possuíssem contraindicação ao uso de BZ. A intervenção foi tratamento com 300 mg/dia de BZ por 60 dias. Para a farmacocinética, foram realizadas dosagens pré-dose e curva pós-dose no primeiro (V2) e no 150 dia (V4) de tratamento. Nos dias 7, 30 e 60 também foram realizadas coletas para dosagens pré-dose. As concentrações plasmáticas do BZ foram determinadas por técnica de cromatografia líquida acoplada a espectrometria de massas em série. A análise de farmacocinética foi realizada pelo software Phoenix WinNonlin® 8.3 da Certara. Os parâmetros estudados foram concentrações plasmáticas máxima (Cmáx) e mínima (Cmin), tempo no qual ocorre o Cmáx (Tmáx), área sob a curva de concentração vs. tempo (ASC) e tempo de meia vida plasmática (T1/2). Os EAs foram avaliados nas visitas de 7, 15, 30 e 60 dias de tratamento e com 2 meses após término do tratamento. Resultados: Foram analisados dados de 24 participantes (35-70 anos; 14 mulheres). Os parâmetros obtidos na V2 foram: Cmáx=2589±475 ng/mL; Tmáx=2,9±1,3 h e ASC[0-6]=11480±2629 h*ng/mL, e na V4 foram: Cmáx SS=8208±1647 ng/mL; Tmáx=2,4±1,2 h; ASC[0-6]=43942±8809 h*ng/mL. Após dose única, o Cmáx foi 32% maior (P=0,00008) e o ASC[0-6] foi 41% maior (P=0,00012) entre mulheres. Após doses múltiplas (V4), não houve diferença entre os sexos. A diferença entre os sexos observada na V2 foi relacionada a diferença de peso entre os sexos, já que quando Cmáx e ASC[0-6] foram corrigidos pela dose normalizada pelo peso a diferença entre os sexos deixou de ser significativa. Em relação à idade, na V2 o ASC[0-6] corrigido pela dose administrada apresentou valor médio 14,5% maior no grupo com menos de 60 anos em relação ao grupo com 60 anos ou mais (P=0,03) e o Tmáx teve retardo de aproximadamente 36% no grupo com menos de 60 anos (P=0,004). Estes achados não se repetiram na V4. O T1/2 apurado após o uso crônico do BZ durante 60 dias foi cerca de 60% maior do que o observado após administração em dose única. Em relação a EAs, 87% dos pacientes descreveu algum EA. Os EAs foram mais frequentes em mulheres que em homens (p=0.03), mas não houve diferença na ocorrência de EAs entre pessoas com mais ou menos de 60 anos. Não houve diferença entre os valores médios de Cmin entre pacientes com e sem EAs. Conclusão: Os parâmetros farmacocinéticos do BZ apresentaram diferença entre os sexos e idade após dose única, sendo a diferença entre os sexos relacionado à dose corrigida pelo peso do participante. O uso crônico do BZ parece favorecer aumento no seu tempo de meia-vida. Houve maior ocorrência de EAs no sexo feminino, mas não entre pacientes mais idosos. Não houve diferença na Cmin entre pacientes que apresentaram ou não algum EA. Perspectivas: Para o próximo ano, esperamos terminar a inclusão de pacientes no estudo, seu tratamento e seguimento, análise de farmacocinética e a análise estatística. Também pretendemos submeter artigo científico para revista internacional com alto índice de impacto.

Bolsista: MARIA JULIA DE FRANCA SOUZA SILVA
Orientador(a): Gabriel da Luz Wallau
Resumo: Os mosquitos são extremamente importantes por seu impacto na saúde humana pois atuam como vetores de diversos patógenos como arbovírus (Zika e Chikungunya) e parasitas que causam a malária. Apesar dos mais variados estudos básicos e aplicados sobre esses insetos eles continuam sendo responsáveis por diversas mortes e casos de surtos endêmicos de arboviroses, principalmente em países tropicais. Dados da Organização Mundial de Saúde estimam que 700 milhões de pessoas perdem a vida devido a doenças de patógenos transmitidos por vetores anualmente. Os mosquitos formam um grupo hiper diverso, com mais de 3 mil espécies descritas dentro da família Culicidae e para a grande maioria dessas espécies há uma carência total de informações de biologia básica e história evolutiva. O objetivo desse projeto é caracterizar a fonte alimentar de mosquitos silvestres que podem ser encontrados no estado de Pernambuco. Para a realização do projeto foram utilizados mosquitos coletados no Zoológico e Jardim Botânico do Recife nos anos de 2018, 2019 e 2020. Esses exemplares foram analisados em uma lupa para realizar sua classificação através de chave de identificação morfológica. O DNA dos indivíduos ingurgitados de cada espécie foi extraído e submetido a amplificação do barcode COI (gene citocromo oxidase c subunidade 1) tanto do mosquito como dos vertebrados utilizados como fonte alimentar pela técnica de PCR. Os fragmentos amplificados foram submetidos a sequenciamento de Sanger, e as sequências obtidas foram submetidas a bancos de dados (BOLD - Barcode of Life Data Systems e BLAST-NCBI) para identificar a sequência de referência. Com o objetivo de aprofundar o estudo do projeto novos experimentos serão realizados com as mesmas amostras utilizadas previamente e com os mesmos primers, porém, com um diferente tipo de sequenciamento. O sequenciamento NGS será realizado a partir de fragmentos gerados por PCR convencional e também serão usados controles positivos e negativos, além de mosquitos que se apresentarem no estado pós digestão. Isto, para verificar quanto de informação podemos obter de repasse sanguíneo já degradado. Após o sequenciamento um pipeline será montado com o objetivo de testar alguns novos programas usados para caracterização de espécies, e assim, ter acesso aos resultados mais fidedignos quanto a alimentação dos espécimes em múltiplas espécies alvo.

Bolsista: GABRIEL ALVES DOS SANTOS ATTANAZIO
Orientador(a): ROSANA GENTILE
Resumo: A compreensão dos padrões e processos que estruturam as comunidades permite determinar não apenas os fatores relacionados à diversidade e distribuição das espécies, mas também avaliar quais são as espécies especialistas e generalistas em uma comunidade, além de ser uma característica importante nos estudos de redes ecológicas. Em relação ao parasitismo, a vulnerabilidade de uma espécie de hospedeiro a um parasito, a dependência deste ao hospedeiro e seu grau de especialização são fatores que influenciam a estrutura das comunidades e estão relacionados aos mecanismos de “spillover”, que ocorre quando um parasito passa a infectar uma nova espécie de hospedeiro. Uma das principais características de um parasito é o seu grau de especialização em hospedeiros, ou seja, o número de espécies de hospedeiros que ele pode explorar com sucesso. O grau de especialização de um parasito é uma característica de sua história de vida e consequência do processo de coevolução parasito-hospedeiro. A maioria dos parasitos apresenta um grau alto de especialização na exploração de seus recursos, contudo, trocas de hospedeiro são comuns. Características dos hospedeiros e variações locais na abundância de espécies hospedeiras, as quais influenciam nas taxas de contato interespecíficas, podem afetar o grau de especialização dos parasitos. Além disso, a composição da comunidade de parasitos no hospedeiro também é fundamental para a troca de hospedeiros. Estimativas do potencial zoonótico de parasitos podem ser feitas usando-se modelos preditivos sobre o compartilhamento de parasitos com diversos hospedeiros, incluindo o ser humano, ou usando-se abordagens baseadas em redes de interações parasito-hospedeiro. Deste modo, os conhecimentos básicos sobre como as comunidades de parasitos estão estruturadas, quais são os padrões encontrados nas interações parasito-hospedeiro e que fatores atuam nas forças destas interações são essenciais para a compreensão da relação entre a biodiversidade e a emergência ou re-emergência de zoonoses. O presente trabalho está inserido num projeto maior sobre biodiversidade, ecologia e parasitismo de pequenos mamíferos reservatórios e potenciais riscos de zoonoses em áreas de Mata Atlântica, trazendo informações essenciais para os aspectos relacionados à biodiversidade, bem como para a compreensão da estrutura das comunidades de parasitos e hospedeiros num dos biomas mais ricos em espécies do mundo. O objetivo geral deste projeto é determinar o grau de especialização de espécies-alvo de parasitos em redes de interações helmintos-pequenos mamíferos em áreas de Mata Atlântica utilizando-se como métrica a força de interação da relação parasito-hospedeiro em escalas local e regional. O estudo utilizará como modelo de estudo a interação ecológica parasito-hospedeiro entre helmintos gastrointestinais e pequenos mamíferos terrestres. O presente estudo utilizará amostras já coletadas em diversas localidades da Mata Atlântica. Informações complementares serão obtidas com dados de literatura e bases de dados. Para comparar o grau de especialização dos parasitos entre diferentes espécies hospedeiras e nas escalas locais e regionais será calculada a medida de força das espécies, a qual considera as somas das dependências de cada espécie na rede de interações. Maiores valores de dependência em uma determinada espécie hospedeira podem indicar maior especialização pelo parasito neste hospedeiro e sua necessidade para a manutenção do ciclo biológico. A medida de força das espécies será calculada utilizando-se presença e ausência, abundância média e prevalência de espécies de espécies-alvo de helmintos, os quais refletem a força de interação entre espécies em uma rede parasito-hospedeiro. Será testada a influência de possíveis fatores no grau de especialização dos parasitos em seus hospedeiros considerando-se escalas locais e regionais utilizando-se análises de Regressão Múltipla.

Bolsista: Carolina Ramalho Mendes
Orientador(a): LETICIA TEREZA BARBOSA DA SILVA
Resumo: Indivíduos recorrem cada vez mais à internet para conhecer mais sobre seu quadro de saúde. As comunidades on-line de saúde (COS) têm se destacado enquanto um dos principais ambientes para obter informação sobre saúde1. Nesse cenário, a qualidade do conteúdo circulado nas COS torna-se uma questão importante. Informação incompleta, incorreta e incompreensível pode ser disponibilizada, possivelmente prejudicando o bem estar e a tomada de decisão dos indivíduos2. Na pandemia de COVID-19, há um grande nível de desinformação sobre a nova doença3. Nesse cenário, este projeto busca analisar a seguinte questão: qual é o grau de acurácia das informações que circulam em uma comunidade on-line sobre COVID-19? Ele possui cinco objetivos: 1) realizar levantamento bibliográfico sobre qualidade da informação em COS; 2) coletar e sistematizar as publicações e comentários da COS; 3) identificar os principais temas sobre COVID-19 debatidos; 4) construir ferramenta de avaliação da acurácia; 5) realizar a avaliação da acurácia do conteúdo, a partir das evidências mais adequadas disponíveis. A realização deste projeto justifica-se devido à importância do debate sobre a acurácia da informação on-line sobre COVID-19. Ao longo da pandemia, foram disseminadas inúmeras notícias falsas, que podem trazer graves consequências3. Assim, a avaliação da informação circulada em uma COS possibilitará identificar o nível de desinformação ao qual os participantes estão expostos. Os resultados podem prover subsídios para o enfrentamento da circulação de informação falsa, além de estratégias que garantam o acesso à informação on-line de qualidade sobre COVID-19 e possam contribuir de modo positivo para o itinerário terapêutico dos indivíduos. A relevância deste projeto reside no método de avaliação adotado. Para Paolucci4 indica o uso de sistemas de informações clínicas, uma vez que agregam de modo conciso as evidências mais relevantes e adequadas4. Até o momento, não há estudos de avaliação da qualidade da informação on-line sobre COVID-19 que adotem este método. Nesse sentido, ao realizar a avaliação da acurácia baseada nas mais atuais e adequadas evidências, este projeto traz uma inovação para o campo da avaliação da informação on-line sobre saúde. A relevância também reside no fato de que ainda não há estudos voltados especificamente para avaliação da acurácia da informação circulada em COS. Em relação à metodologia, a primeira etapa da pesquisa consistirá na realização de um levantamento bibliográfico sobre qualidade da informação em COS, a fim de sistematizar a produção sobre o tema. Em seguida, será feita a coleta das postagens e comentários publicados em uma COS sobre COVID-19 durante o período de três meses. Na sequência, será realizada uma análise temática5, a fim de mapear os principais temas sobre COVID-19 debatidos no grupo. Posteriormente, será construída uma ferramenta para avaliar a acurácia da informação on-line sobre a doença. A fase final consistirá na avaliação da acurácia do conteúdo coletado na COS, utilizando como referência as evidências disponíveis na plataforma Dynamed Plus, que filtra a literatura médica científica a fim de identificar informação clinicamente relevante, atualizada e baseada em evidências.